适冷β-半乳糖苷酶菌株的分离、鉴定、及酶的纯化和性质研究

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β-半乳糖苷酶俗称乳糖酶,广泛分布在动物、植物、微生物中,具有催化糖苷键的水解反应和催化糖基的转移作用。利用β-半乳糖苷酶降解乳糖的能力,生产低乳糖制品(如乳糖水解乳、低乳糖奶粉等),有效解决“乳糖不耐症”,利用β-半乳糖苷酶催化糖基转移的作用可用来生产功能性低聚半乳糖。目前已知的β-半乳糖苷酶基本上属于中、高温酶这个范围,低温β-半乳糖苷酶研究十分不足,因此,本研究重点以南北极低温微生物(嗜冷菌和适冷菌)的低温β-半乳糖苷酶为研究对象,选取在低温下生长速率和相对酶活较高的菌株,开展其适冷β-半乳糖苷酶的筛选,纯化以及酶学特性研究。   本文筛选了300多株来自两极海水、海冰、土壤和深海沉积物的细菌,筛选出90多株活性菌。选择了一株来自北极加拿大海盆CNIS7的菌株BSi20584。经形态观察和16S rDNA初步鉴定,该菌株属于Marinomonas属,暂定名为Marinomonas sp.BSi20584。该菌株在2%NaCl、1%乳糖、O.5%蛋白胨、O.5%酵母粉、pH7.0的初始培养基,30℃摇床培养适宜生长和产酶。通过离子交换和凝胶过滤连续两步纯化,酶的回收率为23.8%,纯化倍数为48.78,并对纯化的β-半乳糖苷酶进行酶学性质研究。该酶的分子量约在67KD,最适pH为7.0,最适作用温度为37℃;该酶在水解底物糖苷键方面,表现出了相当的β1-3键的特异性,尚需做进一步探讨。
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