【摘 要】
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鸡新城疫(Newcastle Disease,ND)是由属禽副粘病毒I型的新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种急性,烈性禽类传染性疾病。未经免疫的鸡群,传播性极强,发病和死
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鸡新城疫(Newcastle Disease,ND)是由属禽副粘病毒I型的新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种急性,烈性禽类传染性疾病。未经免疫的鸡群,传播性极强,发病和死亡率都非常高。而尽管我国各地都对ND采取了高强度的免疫程序,但近年来,随着我国密集养禽地区的增多,新城疫流行仍很严重,成为最难以防治的疾病之一。特别是在1996年以来,不少地区的一些几日龄的雏鸡群中发现类似新城疫的临床症状和病理剖检变化,同时,在种鸡群中发生非典型新城疫以及由NDV感染引起的产蛋下降也相当普遍。针对一些几日龄的雏鸡群中可发现类似于ND的临床表现和病理变化,我们怀疑为先天性感染。同时,针对高抗体水平、有产蛋下降症状的病鸡进行不同器官的NDV分离时,首次分离出病毒的器官通常不是脑、脾脏,而是输卵管,因此我们怀疑是否存在这样一种毒株,它对输卵管或卵细胞等存在一定的组织嗜性,在基因和抗原性上与目前流行的野毒存在着一定的差异。本实验室于2006～2007年自产蛋下降的肉用型父母代种鸡群的种蛋分离得到3株NDV,还同时从肉种鸡输卵管分离到了另1株NDV。本文分别对这四株病毒的抗原性及F和HN基因进行比较分析,以阐述这些毒株与其他毒株差异性。一、病毒的分离鉴定通过本实验室保存的已知的抗NDV、禽流感(H5和H9型)等单因子阳性血清作血凝抑制试验(HI)证明均为NDV,同时对其中的3株病毒在细胞培养上完成了蚀斑纯化。二、交叉HI试验检测抗原性的差异以鸡胚中分离到的三株纯化后的克隆毒以及La sota株疫苗毒和F48E8株标准强毒为抗原制备单因子血清,按照常规HI方法将制备的5株NDV抗原和阳性血清进行交叉HI试验,将5次HI的数据结果平均后,按免疫学方法计算HI相关指数。La Sota对传统强毒F48E8的HI相关程度为0.866,而与从鸡胚得到的分离株则相在0.821~0.829之间;三个分离株之间相关程度较高, TZ060107与SDCX07的HI相关系数为0.986,TZ060107与SDMH07之间为1.00,而SDMH07与SDCX07之间的HI相关系数是0.981。这表明这几个NDV野毒已在抗原性上发生了一定程度的变异。三、F和HN基因的RT-PCR扩增及基因的分析本试验设计了两对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出NDV三个鸡胚分离株F和HN基因全基因序列,并对其进行核苷酸序列测定和分析。结果表明:四个毒株的F基因ORF全长均为1662bp,编码553个氨基酸,裂解位点处氨基酸残基序列为112R-R-Q-K-R-F117,是典型强毒株序列结构;HN基因ORF全长均为1716bp,编码571个氨基酸。对F基因氨基酸同源性的比较结果表明:TZ060107,SDCX07,SDMH07, HNDY07之间同源性非常高为99.5～99.8%,而它们与La sota株的同源性仅为87.9～88.1%,与F48E8株的同源性为91.1～91.3%,与近年来流行的基因VII型毒株的同源性则为95.3～98.7%。对HN基因比较的结果表明:TZ060107,SDCX07,SDMH07,HNDY07之间同源性为99.6～100.0%,与La sota株的同源性为88.1～88.4%,与F48E8株的同源性为89.7～90.0%,与近年来流行的基因VII型毒株的同源性则为90.7～99.1%。这说明当前流行的野毒与传统疫苗无论在F还是在HN基因上都发生了较大的变异。遗传进化树分析得出:该四个分离株为基因VII型,与当前流行的其他基因VII型遗传关系较近,而与La sota株遗传关系较远。
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