猪生长激素基因与白介素-6基因的联合表达效应分析

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本实验将克隆到的猪生长激素(pGH)基因亚克隆到真核表达载体VRl020上,得到pGH基因以正确方向插入的重组真核表达质粒,命名为VpGH,将克隆到的猪白细胞介素6(pIL-6)基因按同样方法构建重组真核表达质粒,命名为VpIL-6。将此二种重组真核表达质粒转化大肠杆菌TOPlOF’,用质粒PCR和酶切的方法验证了此重组质粒为正确插入序列,并大量制备此二种重组真核表达质粒。以薄膜法制备阳离子脂质体,分别包裹VpGH基因、VpGH与VpIL-6基因联合表达后,肌肉注射1周龄昆明小鼠。在注射后的0,7,14,21,28,35天称其体重,同时每周断尾采血分离血清,用ELISA分析免疫小鼠GH,IgG水平,检测白细胞、红细胞、淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞数量的变化。实验结果表明,脂质体包裹VpGH与VpIL-6基因联合注射小鼠较单纯注射VpGH基因试剂的小鼠在体重增长幅度上有显著增强(P<0.05),而二者在细胞免疫和体液免疫反应上无显著差异。 根据小鼠实验所得到的结果将这种基因试剂在猪身上做了实验。将阳离子脂质体包裹VpGH基因、VpGH与VpIL-6基因联合表达试剂注射实验猪,检测了猪的增重情况。结果发现,与单纯注射VpGH基因的猪相比,注射VpGH与VpIL-6基因联合表达试剂的猪增重效果明显。对照小鼠实验,所有这些结果都表明阳离子脂质体包裹VpGH与VpIL-6基因联合表达试剂较单纯注射VpGH基因能更好的促进动物的生长。说明VpIL-6有增强VpGH表达的趋势,表现出较好的分子佐剂效应,在动物促长方面具有明显的加性作用,为一种新型高效的猪用DNA分子促长基因制剂的研究奠定了良好的基础。
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