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缺血性脑卒中是老年人的常见疾病,具有高发病率、高死亡率、高致残率的特点。且每年都呈上升的趋势,严重危害着人类健康,并给社会和家庭造成沉重的精神和经济压力。在卒中的治疗方面,溶栓治疗是目前公认有效的治疗措施。但由于该方法时间窗短,继发脑出血风险大,限制了其在临床上应用。对于脑保护的研究成为目前脑卒中研究的热点之一,将溶栓治疗和脑保护治疗结合在一起是今后卒中治疗的方向。目前对于缺血性脑卒中的脑保护治疗多集中在改善脑部循环、抗自由基、抗兴奋性氨基酸等方面,而微血管的损伤可加重脑水肿,引起梗死后出血转化,导致炎性细胞浸润和炎症因子进一步释放,形成炎症的发大和正反馈。因此微血管构成的血脑屏障结构在缺血性脑卒中神经损害中起至关重要的作用,日益成为缺血性脑卒中治疗的新的靶点；同时Rho激酶是一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,Rho/Rho激酶系统可通过下游效应因子对细胞的分裂、收缩、粘附、迁移、分泌等活动具有重要调节作用,在缺血性脑血管病中,Rho/Rho激酶系统可以促进炎性因子释放,介导缺血后炎症反应发生。目前对于Rho激酶在缺血性脑卒中介导微小血管损伤及具体机制探讨少有相关研究报道。本研究旨在运用线拴法制备大鼠缺血再灌注模型通过观察不同时间点Rho激酶、S100B、基质金属蛋白酶(MMP)之间表达相关性及与脑微血管损伤的关系,探讨Rho激酶通过调节S100B、基质金属蛋白酶(MMP)的表达而介导了大鼠缺血再灌注后微血管的损伤,为Rho激酶成为缺血性脑卒中微血管损伤新的靶点提供了实验依据。第一部分缺血再灌注不同时间点Rho激酶表达的变化及与微血管损伤的关系目的：观察大鼠缺血再灌注模型(MCAO)不同时间点Rho激酶表达的变化及与微血管损伤的关系。方法：将在我校实验动物中心购得的雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组、MCA06、24、48、72h模型组,每组各15只。并分别运用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞的缺血再灌注6、24、48、72h模型。本部分试验运用RT-PCR检测假手术组、MCAO组缺血90分钟再灌注6、24、48、72h Rho激酶mRNA水平的变化,并于各再灌注时间点处死大鼠后取梗死侧缺血半暗带脑组织测定伊文思蓝(EB)含量来观察血脑屏障的通透性的改变；免疫组化染色及层粘蛋白(Laminin)表达水平测定,并观察他们之间的关系。结果：大鼠神经功能缺损评分缺血再灌注6、24、48、72h四组与假手术组相比,有显著差异(P<0.01)；各模型组之间神经功能评分相比较无显著差异(P>0.05)。Rho激酶mRNA表达、EB含量、Laminin表达在各组间差异均具有显著性(P<0.05)；缺血再灌注6、24、48、72h四组与假手术组相比均有显著性差异(P<0.01)。Rho激酶mRNA表达、EB含量均于缺血再灌注的早期(6h)开始逐渐升高,在再灌注48h时达到高峰,此后逐渐下降；Laminin表达在缺血再灌注的早期开始逐渐下降,在再灌注48h时达到最低点,此后逐渐上升。Rho激酶mRNA表达与EB含量呈直线相关,r=0.925,P=0.025<0.05:Rho激酶表达与Laminin表达直线相关,r=-0.955,P=0.011 <0.05;EB含量与Laminin表达直线相关,r=-0.982,P=0.003<0.01。结论：在缺血再灌注不同时间Rho激酶的表达和微血管损伤之间具有相关性。第二部分缺血再灌注大鼠脑微血管损伤的机制探讨目的：选取缺血90分钟再灌注24小时时间点,通过Rho激酶抑制剂干预,观察S100B.MMP-9表达的变化及关系,初步探讨Rho激酶介导微血管损伤中的的发生机制；并观察Rho激酶抑制剂对大鼠缺血再灌注微血管损伤的保护作用。方法：将在我校实验动物中心购得的雄性SD大鼠30只随机分为3组：假手术组、MCAO模型组、Rho激酶抑制剂干预组,同实验第一部分制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞的缺血再灌注24h模型。运用实时定量RT-PCR测定法检测三组中大鼠缺血半暗带脑组织S100B蛋白、MMP-9 mRNA水平的变化及关系；观察Rho抑制剂干预组大鼠神经功能缺损评分、伊文思蓝含量、Laminin表达水平、脑组织含水量,并与假手术组、MCAO模型组作对照。结果：大鼠神经功能缺损评分、EB含量、Laminin表达水平、脑组织含水量,在缺血再灌注24h组较假手术组相比差异有显著性(P<0.05);Rho激酶抑制剂组与缺血再灌注24h组相比差异有显著性(P<0.05)。缺血半暗带脑组织S100B蛋白、MMP-9 mRNA在缺血再灌注24h组较假手术组相比表达明显升高,差异有显著性(P<0.05)；Rho激酶抑制剂组使用Rho激酶抑制剂可使其表达降低,与缺血再灌注24h组相比差异有显著性(P<0.05)结论：1、Rho激酶抑制剂减轻了微血管损伤与脑组织水肿,降低了血脑屏障通透性,对于微血管具有保护作用。2、Rho激酶通过S100B和MMP-9介导了大鼠脑缺血再灌注后微血管的损伤；