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主要组织相容性复合体（MHC）是位于哺乳动物某一染色体上的一组紧密连锁的基因群,是参与抗原提呈和T细胞激活的关键分子。严重急性呼吸综合症（SARS）是一种高致病性、高流行性和高死亡率的新型人类传染疾病。MHC-肽复合体技术可在体外对SARS-CoV抗原表位进行鉴定,并可对疫苗进行初步且可靠的评价。对SARS-CoV S蛋白进行的抗原表位预测表明其存在有能够同人MHC （HLA）分子较高亲和力结合的抗原表位,暗示这一区域对于刺激机体产生免疫应答具有重要作用。本研究通过体外重建HLAⅠ类分子复合体对SARS-COV S蛋白的4条T细胞抗原表位肽进行鉴定。主要内容包括:1.参照GenBank发表的HLA-Aα链成熟肽胞外区和β2m成熟肽基因序列,分别设计合成1对特异性引物,提取外周静脉血总RNA进行RT-PCR扩增后分别克隆到pGEM-T Easy载体上并测序。结果显示α链胞外区成熟肽基因全长819 bp,编码273个氨基酸,分子量为31.45 KDa,其中疏水氨基酸26.53%,亲水氨基酸28.83%,与Genbank中所参照的HLA-A成熟肽基因序列（NM002116）的同源性为93%。经与牛、鸡、狗、鸭、青蛙、鹅、草鱼、马、鼠、猩猩、鹌鹑、猕猴、猪等的MHCⅠα成熟肽胞外区基因序列进行比对分析,其核苷酸同源性分别为76.9%、38.5%、81.9%、39.1%、31.4%、39.3%、29.7%、81%、68.1%、83.5%、39.5%、81%、76.6%。β2m成熟肽基因全长297 bp,共编码99个氨基酸,分子量为11.73KDa,其中疏水氨基酸28.15%,亲水氨基酸29.24%,与GenBank中所参照的人β2m成熟肽基因序列（NM004048）的同源性为100%。与牛、鸡、鱼、猕猴、鼠、鸭嘴兽、猩猩、羊等的β2m成熟肽基因进行比较发现其核苷酸同源性分别为73.5%、45.5%、47.4%、90.9%、69.7%、53.6%、100%、73.5%。2.为了获取HLA-Aα链成熟肽胞外区和β2m成熟肽蛋白质分子,分别合成1对引物,将编码HLA-Aα链和β2m胞外区成熟肽基因亚克隆到原核表达载体pET-28 a （+）中,成功获得了重组质粒pET-28 / HLA-Aα和pET-28 / HLA-β2m;构建成功的基因工程大肠杆菌经适宜浓度的IPTG诱导后,经SDS-PAGE检测分析α链胞外区和β2m成熟肽基因分别在31.45KDa和11.73KDa处出现大量表达,且表达情况表明,α链胞外区和β2m成熟肽基因在重组大肠杆菌中均以包涵体形式得到了高效稳定的表达,且包涵体纯度均达到90%以上。3.为体外重建HLAⅠ类分子,并利用其鉴定了感染人的T细胞表位,我们预测,设计合成了SARS-CoV S蛋白的4条抗原表位肽:SP1（QIAPGQTGW）、SP2（VIADYNYKL）、SP3（VLAWNTRNI）、SP4（KLRPFERDI）。运用表达的HLA-Aα链成熟肽胞外区蛋白和HLA-β2m成熟肽蛋白与各个9肽分别按照1:1:3的摩尔比共复性。非还原性SDS-PAGE结果显示SP4（KLRPFERDI）与HLA-Aα、HLA-β2m成功重建了HLA-A /肽复合物。SARS-CoV S蛋白T细胞表位的鉴定证实,体外重建的人HLAⅠ类分子的胞外区可以结合鉴定T细胞表位肽。这为多肽疫苗候选表位的筛选提供了一种颇具潜力的工具。