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目的:RNA干扰技术(RNAinterference,RNAi)是近几年来新兴的基因控制技术,它能特异地沉默内源或外源性靶基因,在多种生物体的研究中都可应用,包括植物、真菌、病毒、哺乳类动物等.这项新技术不仅可应用于基础研究,还有望成为攻克肿瘤、艾滋病、遗传性疾病等的新的克星,尤其siRNA(small interfering RNA)在治疗疾病方面将有更广阔的前景.肿瘤的发生、发展和转移及对放化疗的抗性大多源于细胞凋亡缺陷.bcl-xL属bcl-2抗凋亡家族成员,其在多数恶性肿瘤组织中表达丰富,能抑制多种因素诱导的细胞凋亡.该文旨在研究RNAi效应对CNE-2Z和MCF-7细胞株bcl-xL基因表达的抑制作用及其对两株细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用;探讨RNAi新技术在抗肿瘤基因治疗方面的应用前景,bcl-xL作为恶性肿瘤治疗靶点的可能性及bcl-xL siRNA被开发为药物的潜在可能性.方法:根据人bcl-xL基因序列及其二级结构特征,依据Tuschl等设计siRNA 原则,使用Ambion公司提供的网上设计软件,确定并利用Silencer siRNA construction Kit体外转录合成针对bcl-xL基因的siRNAs;应用FAM-Silencer siRNA Labeling试剂盒标记siRNAs;利用阳离子脂质体转染试剂将FAM-siRNAs 转染至CNE-2Z和MCF-7细胞中,荧光显微镜下观察和流式细胞仪检测siRNAs 的转染效率;半定量RT-PCR法筛选有效的靶序列,WESTERN-BLOT检测siRNAs的抑制效应,进一步确证RT-PCR的实验结果;MTT法检测siRNAs对细胞生长增殖抑制的效应;流式细胞术检测siRNAs诱导细胞凋亡的效应,荧光显微镜下观察经siRNAs处理后,肿瘤细胞的形态学变化,进一步确证流式细胞术的检测结果.结论:Lipfectamine 2000在CNE-2Z和MCF-7细胞株中对不同siRNAs的瞬时转染效率较高,针对bcl-xL特异的siRNAs的转染效率具有剂量依赖性.CNE-2Z细胞中也存在RNAi效应,体外转录合成的siRNAs能特异有效的下调bcl-xL基因的表达,不同序列特异性的siRNAs下调bcl-xL基因表达的能力不同.虽然bcl-xL siRNA在癌细胞中能特异有效地阻抑bcl-xL基因表达,但其不能使目的基因完全沉默.瞬时转染bcl-xL siRNA4能有效抑制恶性肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡.低剂量bcl-xL siRNA对瘤细胞显示光谱的抗增殖作用,表明它将很可能被开发成一种强效的抗瘤药物.抑制性siRNAs不仅为基因组功能分析提供了强有力的工具,而且为肿瘤基因治疗提供了新方法.