自噬基因MAP1LC3在激素性股骨头缺血坏死中的作用及3-MA对其影响的实验研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zy34970348
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目的:在使用激素诱导出激素性股骨头缺血坏死动物模型的基础上,检测激素是否可以导致骨细胞、成骨细胞MAP1LC3的mRNA与蛋白高表达;探讨3-MA调控骨细胞、成骨细胞自噬型死亡以及骨细胞、成骨细胞MAP1LC3的mRNA与蛋白高表达。  方法:选健康5月龄新西兰大耳白兔36只,体重(2.0-2.5)kg,雌雄不限,标准饮食,单笼饲养。随机分成3组,A组12只,为对照组,单纯肌肉注射生理盐水,2ml/只/次,共4次,间隔一周;B组12只,肌肉注射甲基强的松龙,4mg/kg,共4次,间隔一周;C组12只,肌肉注射甲基强的松龙,4mg/kg,共4次,间隔一周,并于注射甲基强的松龙后随即肌肉注射3-MA2μl/只,共4次,间隔一周。分别将每组实验动物于一周、二周、三周、四周后采用空气栓塞法处死,每次处死3只。相对无菌条件下取出实验动物双侧后肢的股骨头:左侧股骨头分成两部分:①一部分经40﹪中性甲醛固定用于HE染色后光镜观察组织学表现;②另外一部分经5﹪戊二醛溶液固定,供透射电镜、免疫荧光电镜观察。③右侧股骨头分离提取骨细胞、成骨细胞,-80℃冰箱保存,进行MAP1LC3的mRNA与蛋白表达、自噬型细胞死亡检测。  结果:1、B组的MAP1LC3mRNA呈高表达,C组中骨细胞的MAP1LC3mRNA表达量较B组均降低(P<0.05)。2、B组中MAP1LC3蛋白高表达,C组中MAP1LC3蛋白表达明显下降(P<0.05)。3、免疫荧光染色:B组中骨细胞、成骨细胞的GFP-LC3融合蛋白表达均较对照组升高,C组GFP-LC3融合蛋白表达明显下降(P<0.05)。  结论:1、激素可导致SANFH模型中骨细胞、成骨细胞的自噬型细胞死亡。2、激素可导致骨细胞、成骨细胞的MAP1LC3的mRNA与蛋白高表达。3、3-MA可抑制骨细胞、成骨细胞自噬型细胞死亡。
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