论文部分内容阅读
蛋白磷酸酶PP4(proteinphosphatase4，PP4)是丝/苏氨基酸磷酸酶家族的重要成员之一，它以复合体形式发挥功能，包括催化亚基(PP4c)和调节亚基(PP4R2和PP4R3等)。目前已从不同组织中纯化出多种PP4复合物，这些复合物与细胞内诸多功能事件相关。PP4复合体在果蝇与线虫中参与了中心体成熟、同源染色体交叉等进程，在哺乳动物细胞中参与了多个细胞信号通路的调节，以及剪接体复合物的组装，DNA损伤修复等。
本论文工作利用PP4c特异性肽段的抗体，通过间接免疫荧光技术，并结合GFP分子标签对PP4c在细胞周期不同时相中的定位进行了全面系统的分析。研究结果表明，在中心体这个亚细胞库中，PP4c在间期及有丝分裂的前期、中期、中后期都定位于中心体；后期及末期时从中心体上脱离；而在胞质分裂时PP4又重新定位于中心体上。
顺铂作为抗肿瘤药物已被广泛的应用到肿瘤化疗中。为了探讨PP4在DNA损伤修复中的作用，以及对顺铂抗肿瘤药效的影响，我们利用.RNAi干扰技术，以人肺腺癌细胞A549为实验材料，筛选出催化亚基(PP4c)低表达细胞株。对PP4c正常表达与低表达的细胞分别用顺铂处理，并对DNA的损伤以及直接参与损伤修复的γH2AX(γHistone2AX，γ组蛋白2AX)进行检测。结果发现PP4c表达水平被抑制的细胞株对顺铂处理非常敏感，并且这种敏感性有时间和浓度依赖性。我们发现，顺铂处理细胞会导致DNA双链断裂，形成γH2AXfoci。进一步分析表明细胞中γH2AX不能正常去磷酸化，会引起修复失败，进而导致细胞凋亡或周期阻滞。我们推测，在哺乳动物细胞中，PP4c参与了DNA损伤修复中重要蛋白γH2AX的调控，由此与DNA损伤药物的敏感性相关。