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近些年来,随着我国社会和经济的快速发展,食品数量和种类不断增多,同时食品安全问题也愈发严重。牛奶中激素残留现象屡见不鲜,严重威胁着人类健康。抗生素是水环境污染物中较为常见的一种,其滥用和误用诱导了耐多药细菌的产生,对人体健康和水生态系统造成了很大危害。因此,开发快速有效的检测牛奶中激素和水体中抗生素的方法势在必行。本实验结合了在线固相萃取和高效液相色谱技术,分别建立了牛奶中5种激素和水体中两种抗生素的检测方法,样品经简单处理后上样,简单快捷,实验结果令人满意,对卫生检验的实际工作具有指导意义。第一部分在线固相萃取-高效液相色谱法同时检测牛奶中5种激素残留目的:建立在线固相萃取-高效液相色谱法(On-line SPE-HPLC),用于牛奶中泼尼松龙、地塞米松、睾酮、甲基睾酮和醋酸甲地孕酮5种激素的检测。方法:牛奶样品经乙腈沉淀蛋白后离心,取上清液进样,以双梯度高效液相色谱系统的右泵为富集泵,15%的甲醇为流动相,将样品富集到PEP在线固相萃取柱,杂质由废液口流出。以双梯度高效液相色谱仪的左泵为分析泵,以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,通过六通柱切换阀将目标分析物由在线固相萃取柱转移至分析柱进行分离,紫外检测器检测,外标法定量。结果:通过对液相色谱条件和在线富集条件的优化,5种待测物均在0.05~25.0μg/mL的范围内线性相关性良好,r=0.9998,检出限分别为0.008μg/mL、0.009μg/mL、0.009μg/mL、0.013μg/mL和0.012μg/mL(S/N=3),定量限分别为0.026μg/mL、0.031μg/mL、0.029μg/mL、0.043μg/mL和0.040μg/mL(S/N=10)。空白牛奶样品在0.50μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL三个添加水平的加标回收率为75.98%~115.75%。日内精密度和日间精密度均小于5.44%,样品在室温条件下24 h内稳定。结论:本实验建立了在线固相萃取-高效液相色谱法同时测定牛奶中5种激素残留的方法,样品处理简单快速,有机试剂使用量少,检测时间短,重现性好,方法学验证结果令人满意,该方法可应用于检测牛奶中激素的残留。第二部分在线固相萃取-高效液相色谱法同时检测城市河水中的克拉霉素和罗红霉素目的:建立在线固相萃取-高效液相色谱法(On-line SPE-HPLC),用于城市河水样品中克拉霉素和罗红霉素的检测。方法:水样经0.22μm滤膜过滤后直接进样,以双梯度高效液相色谱系统的左泵为富集泵,10%的乙腈为流动相,将样品富集到PEP在线固相萃取柱,杂质由废液口流出。然后以双梯度高效液相色谱系统的右泵为分析泵,乙腈-0.01 mol/L磷酸盐(57:43,v:v)洗脱,通过六通柱切换阀将待测物由在线固相萃取柱转移至分析柱进行分离,紫外检测器检测,检测波长为210 nm,外标法定量。结果:通过对液相色谱条件和在线富集条件的优化,克拉霉素和罗红霉素均在0.50~50.0μg/mL的范围内线性相关性良好,标准方程分别为Y=0.1465X-0.0687,r=0.9999;Y=0.3923X-0.1926,r=0.9998。检出限分别为0.24μg/mL、0.10μg/mL(S/N=3),定量限分别为0.80μg/mL、0.34μg/mL(S/N=10)。空白水样在1.0μg/mL、25.0μg/mL、40.0μg/mL三个水平的加标回收率为94.38~120.98%,日内、日间精密度均小于4.14%,样品在室温条件下24 h内稳定。结论:本实验建立的方法简单稳定,专属性和重现性良好,自动化程度高,回收率和灵敏度均可满足检测要求,该方法可应用于检测水样中抗生素的残留。