【摘 要】
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通过检测植入活体兔子角膜中受双光子诱导荧光微球标记的角膜细胞,来建立一种全新的非线性成像方法。并为临床应用双光子诱导激光检目镜进行诊断以及对角膜伤口愈合过程作出
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通过检测植入活体兔子角膜中受双光子诱导荧光微球标记的角膜细胞,来建立一种全新的非线性成像方法。并为临床应用双光子诱导激光检目镜进行诊断以及对角膜伤口愈合过程作出探索。经体外培养由蓝绿荧光,直径约1微米的荧光微球标记的兔子角膜纤维母细胞(RCF),被显微注射入活体兔子的角膜基质层中。在注射后6小时和6天,双光子诱导的荧光信号和细胞形态分别被新型设计的海德堡双光子激光检目镜采集。RCF标记的荧光特异性又经过激光共聚焦显微镜证实。体外细胞形态和荧光标记物的损失通过荧光倒置显微镜评估。实验结果表明,体外细胞观测显示荧光标记物可经由RCF细胞与微球隔夜培养后被细胞胞吞。通过显微注射入活体兔子角膜后,双光子诱导的荧光信号能够分别在注射后6小时和6天中被检测出。并且体内和体外观测实验表明被胞吞的荧光微球没有在细胞外被检测出。这项研究证实了,利用非线性光学显微镜来检测,经由显微注射标记细胞到活体组织中,所采集双光子诱导的荧光信号的可行性。这种方法也提供了可行的体内原位长期追踪活细胞的实践,避免了传统荧光显微镜检测引起的光漂白和光诱导细胞毒性的弊端,同时提供了更深的组织穿透能力和更高的轴向分辨率。
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