【摘 要】
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目的: 本研究通过建立大鼠BMSCs体外分离、纯化的培养方法,观察G-CSF对BMSCs增殖的影响,并对G-CSF和GDNF在BMSCs神经细胞分化中作用进行探讨。 方法: 1、无菌条件下采
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目的:
本研究通过建立大鼠BMSCs体外分离、纯化的培养方法,观察G-CSF对BMSCs增殖的影响,并对G-CSF和GDNF在BMSCs神经细胞分化中作用进行探讨。
方法:
1、无菌条件下采集2周龄SPF级SD大鼠的股骨和胫骨的骨髓细胞,使用含10%FBS的DMEM/F12培养液进行培养,从细胞贴壁性、免疫表型和脂肪分化三方面进行BMSCs鉴定:
2、MTT法测定G-CSF对BMSCs增殖的影响;
3、取P5细胞,10ng/ml bFGF进行预诱导24h后,按GDNF和不同浓度的G-CSF组合分组(B1-5)进行成神经元细胞诱导,并从细胞形态变化、RT-PCR对GFR-α1mRN,A表达水平进行检测,鉴定诱导所得细胞;
4、统计学数据均用均数士标准差(-x±s)表示,采用SPSS13.0软件处理,方法是单因素方差分析和g检验法,检验水准α=0.05。。
结论:
1、差速贴壁法可以有效地分离纯化BMSCs;
2、G-CSF可有效地促进BMSCs增殖;
3、联合应用GDNF和适宜浓度的G-CSF,比单用GDNF更有效地诱导BMSCs分化为表达GFR-α1的神经元样细胞。
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