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本实验通过体外细胞培养方法观察了黄芪、板蓝根、半支莲、千里光、金银花、大青叶、野菊花等15种单味中药抗伪狂犬病毒的效果,测定了15种单味中药对猪肾细胞(PK—15)的毒性,PRV对细胞的半数致死量(TCID50),以及三种作用方式下中药对病毒的影响,筛选出在一定程度上抗伪狂犬病毒的单味中药,并对其进行组方,观察四种复方对小鼠某些免疫指标(脾脏指数、脾脏淋巴细胞增殖、IFN—γ、球蛋白及其它生化指标)及抗氧化能力(SOD、MDA)的影响,从中筛选出中药复方Ⅲ,经过细胞内抗病毒实验进行了流式分析和DNA电泳观察,初步探讨了中药复方Ⅲ抗病毒的作用机理,得出以下结果。
(1)15种单味中药对PK细胞的毒性大小,按小到大排列为:黄芪<香薷<板蓝根<千里光<连翘<半枝莲、地胆草<大青叶<鱼腥草<野菊花<黄芩<金银花<贯众<冰片<蟾酥;PRV的TCID50=10-4.16/0.1 ml。
(2)15种单味中药中,三种作用方式都对PRV有较强抑制作用的中药有金银花、野菊花、蟾酥、板蓝根、鱼腥草、半枝莲。
(3)复方制剂Ⅲ可显著提高小鼠脾脏指数(p<0.05)。
(4)四种复方制剂均可促进T、B淋巴细胞增殖,尤其以复方Ⅲ促进B淋巴细胞增殖和复方Ⅳ促进T淋巴细胞增殖最为突出(p<0.05)。
(5)复方制剂Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ促进小鼠血清细胞因子IFN—γ分泌,而复方Ⅲ组的作用更加明显(p<0.05)。
(6)复方Ⅲ与其他灌药组相比,对机体造成的危害最少,而且能显著提高血清中的免疫球蛋白(P<0.05),从而提高机体的免疫力。
(7)复方Ⅲ对PK—15细胞的半数毒性浓度为31.26 mg/ml。
(8)复方Ⅲ能够使由于感染PRV的PK细胞周期G2期受阻滞减轻,尤其是预防组(p<0.05),随着时间的延长,作用更明显。并且能使细胞的DNA损伤降低,DNA断裂减少,细胞凋亡减少。
实验证明部分清热类中药具有抗病毒作用,如金银花、野菊花、蟾酥、板蓝根等;由其组成的复方Ⅲ能显著地提高小鼠的机体免疫力及抗氧化能力;复方Ⅲ抗病毒的机制可能是药物使感染PRV的PK细胞周期G2期阻滞减轻,使DNA损伤降低,使细胞凋亡减少。