肝癌相关成纤维细胞增强肿瘤细胞干性能力的基础研究

• 作 者: 陈家杰
• 机 构: 中山大学
• 出 处: 中山大学
• 发表日期: 2015年期
• 关键词: 肝癌 肿瘤相关成纤维细胞 细胞干性 临床用药

本文分为两个部分进行探讨：　　第一部分　　原发性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是恶性程度极高、预后极差的恶性肿瘤，数十年来在诊断、治疗等各方面的进展有限。肿瘤微环境已成为肿瘤治疗中新型靶点。肿瘤相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts，CAF)是其中主要的宿主细胞之一。前期研究发现肝癌组织来源的CAF能分泌细胞因子促使HCC细胞的增殖、迁移与侵袭和对铂类药物耐药。本研究进一步发现CAF与HCC细胞共培养能增强细胞的克隆形成与成球形成能力，表现出增强HCC细胞的干性能力，这一能力与CAF分泌出IL6细胞因子激活HCC细胞内的STAT3信号通路有关。用STAT3抑制剂（STAT3i）或anti-IL6拮抗抗体抑制IL6/STAT3信号通路能有效减弱CAF增强HCC细胞干性能力。另外，通过划痕标记染料示踪技术结果表明肝星状细胞LX2，NLF(Normal liver fibroblast，正常肝纤维细胞)和CAF细胞均有明显的缝隙连接细胞通讯作用(Gap junction intercellular communication，GJIC)，CAF细胞的活性表现最强。而HCC细胞的细胞通讯作用异常低。与NLF相比，GJIC生物标志物Cx43在CAF中表达较高，这一GJIC可能与成纤维细胞激活相关。接着，通过GJIC阻断剂甘珀酸(Carbenoxolone，CBX)或干扰Cx43表达能抑制GJIC使LX2细胞失活，且减弱LX2细胞增强HCC细胞的干性能力的作用，表现为下调成纤维细胞激活生物标志物CollagenⅠ和α-SMA的表达。另外，CBX同样也能减弱TGFβ因子促使LX2细胞激活，下调CollagenⅠ，α-SMA和IL6的表达。同样地，CBX有效地减弱CAF增强HCC细胞的干性能力，表现为抑制CAF细胞中成纤维细胞激活的标志物CollagenⅠ，α-SMA和IL6的表达。随着CBX浓度增加明显地更能抑制CAF细胞的生长增殖。CAF与HCC细胞共培养后能增强HCC细胞的成球能力，而CBX能明显地逆转了这一现象。流式检测分析表明CBX能有效地逆转CAF上调HCC细胞的CD133和CD90表达的现象。结论，GJIC的活性与CAF细胞的激活有着相关性，抑制CAF细胞的GJIC活性能有效地逆转CAF增强HCC细胞的干性能力。本研究可进一步完善CAF成为肝癌治疗的重要靶点的基础理论，为肝癌治疗提出新的治疗方案和提高治疗效果。　　第二部分　　旧药新用是加速药物开发的最重要的方法之一。pimozide是二苯类的FDA批准的抗精神病药。由于其临床上相对较低的副作用和高安全性，pimozide基于老药新用理论用治疗各种疾病具在实质上的转化意义。在我们的研究中，发现神经松弛药pimozide在HCC治疗中有明显的抗癌活性。Pimozide能抑制HCC细胞的细胞增殖，克隆形成和球体形成的能力。另外，Pimozide也能抑制肝癌干样细胞SP+和CD133+细胞的细胞增殖与细胞克隆能力。Pimozide能有效地抑制HCC细胞内的STAT3信号活性。Pimozide能有效地逆转IL6增强HCC细胞的干性能力。因此，表明神经松弛药pimozide已获得FDA批准，具有抗肝癌治疗的潜在活性。本研究探讨了pimozide能否抑制肝癌细胞的增殖与其作用的分子机制，这可为寻找肝癌防治的新型药物开发提供理论基础与解决方案。