食品加工设备中金黄色葡萄球菌生物被膜研究

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本研究以果汁饮料加工设备为研究对象,确定了构成设备管件生物被膜(Biofilm, BF)的主要微生物种类,针对形成活菌数最多的生物被膜进行研究,结合细菌16SrRNA的PCR-SSCP序列分析比较,确定被膜中的主要微生物为金黄色葡萄球菌;考察了培养条件对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响;常用食品添加剂对生物被膜的抑制作用,和设备清洗剂对生物被膜的清洗效果,为深入研究控制食品加工设备中金黄色葡萄球菌生物被膜的污染提供理论依据。主要研究结果如下:1.经过16SrRNA序列特征分析表明,形成该BF活菌数最多的菌株与模式菌株同源性达到99%,确定为金黄色葡萄球菌;银染法和结晶紫染色法检测结果表明,不同培养时间段的生物被膜,随着培养时间的延长,菌落不断增大,被膜颜色逐渐加深;当培养3d时,BF的量达到最多。2.考察生物被膜的生长特性,结果表明,当培养0-2h时,金黄色葡萄球菌生物被膜菌落数呈指数增长趋势,表明该阶段是金黄色葡萄球菌在不锈钢片的附着期,也是生物被膜的快速形成期,在培养大约12h时,被膜基本形成,在12-72h之间菌落数基本保持恒定,不随培养时间的增加而增加。3.研究了外源糖分、温度、pH、初始悬浮菌浓度对BF的影响,结果表明,残留的葡萄糖、乳糖、麦芽糖、果糖、蔗糖等各种糖分在浓度较低的范围内都能够促进生物被膜的形成,且2%的葡萄糖对BF的形成促进作用最明显;温度、pH、初始悬浮菌浓度对BF的形成均有不同程度的影响,且各因素间相互作用对微生物的成膜效果有影响。4.研究10种常用的食品添加剂对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用,结果表明,柠檬酸对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用最明显;在浓度为0.06%时,可抑制生物被膜的形成,且具有抑制金黄色葡萄球菌生长的作用;当柠檬酸浓度为0.12%时,生物被膜中的活菌可完全被抑制或杀死;柠檬酸与其他三种食品添加剂分别同时作用于生物被膜时,对生物被膜活菌数的抑制效果明显高于柠檬酸单独作用。可见,柠檬酸与其他防腐剂同时作用,可以增强柠檬酸防腐抑菌能力,提高抑菌效果。5.对比同一浓度的设备清洗剂过氧化氢、次氯酸钠、二氧化氯对金黄色葡萄球菌生物被膜的清除效果,结果表明,H202的清除效果最好。6.当不含有机物质时,在过氧化氢添加量为0.08%和0.1%分别作用20min和15min,对金黄色葡萄球菌菌悬液的杀菌率达到100%;而对BF,则需分别作用35min和20min才可以达到100%杀菌率。7.当含0.1%(W/V)有机物时,在过氧化氢浓度为0.08%作用20min后,对金黄色葡萄球菌菌悬液的杀菌率即可达到100%。而对BF,过氧化氢浓度为0.1%时,需作用25min时,杀菌率才可达到100%;
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