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近年来我国南方沿海许多养殖场的杂色鲍出现了严重的疾病,该病可感染各种规格的鲍,死亡率很高。病鲍主要症状表现为:足部肌肉萎缩,外套膜和肝胰腺缩回,摄食量减少,无生气,附着力下降,最终死亡。我们从鲍生长过程中的环境理化因子和生物因素着手,分析病因,排除了环境理化因子和寄生虫等的直接影响,病毒悬液感染健康杂色鲍未出现发病和死亡情况,超微电镜观察也未发现病毒粒子。
从患“肌肉萎缩症”的杂色鲍体内分离纯化到3株优势菌WS、WS1和WS2,人工感染试验表明所分离的菌株WS和WS1对杂色鲍有明显的致病作用,人工感染发病的杂色鲍症状与自然发病症状相似。对菌株WS和WS1进行形态学观察和常规生理生化检测,主要特征为革兰氏染色阴性,极生单鞭毛,杆状弯曲,弧菌选择性培养基TCBS上生长良好,生长需Na+,具运动性,氧化酶和接触酶阳性,发酵葡萄糖产酸,还原硝酸盐,对弧菌抑制剂敏感,可初步判定为弧菌属细菌Vibrio sp.。形态学特征和进一步生理生化测试表明菌株WS与哈维氏弧菌Vibrio harveyi最为接近,在是否发光、纤维二糖和半乳糖利用、鸟氨酸脱羧酶、明胶酶和淀粉酶六个方面不同,菌株WS1与弗尼斯弧菌Vibrio furnissii最为接近,仅在10%NaCl生长、鼠李糖和脂酶利用三个方面不同。
为进一步确定其分类地位,测定了2株病原菌的16S rRNA和HSP60基因部分序列,进行序列分析和同源性对比,构建系统发育树。16S rRNA基因系统进化分析表明:菌株WS和WS1分别与V.harveyi[AY750577]和V.furnissii[X76336]聚为一个分支,其同源性都达99.7%,但与其它多数菌株间同源性均大于97.5%,差异不显著。HSP60基因序列分析表明:菌株WS和WS1分别与V.harveyi[AF230934]和V。furnissii[AF230946]聚为一个分支,且同源性分别达96.8%和95.3%,并与其它弧菌菌种HSP60基因序列间差异较大,同源性均低于90.5%,差异显著。综合上述结果,将菌株WS和WS1分别鉴定为哈维氏弧菌和弗尼斯弧菌。
药敏实验表明菌株WS对氯霉素、环丙沙星和氧氟沙星高度敏感,但对链霉素、红霉素、卡那霉素、氨苄西林、头孢唑啉、新霉素、新生霉素、利福平和万古霉素产生耐药性。菌株WS1对四环素、氧氟沙星高度敏感,但对氯霉素、链霉素、卡那霉素、氨苄西林、头孢唑啉、新霉素、新生霉素和利福平产生耐药性。
采用病理组织学的方法,以正常样品作为对照,对患“肌肉萎缩症”杂色鲍的不同组织进行了病理学观察。病鲍腹足、外套膜、鳃、肝胰腺和肠道均呈现不同程度的病理变化,病理特征主要表现为:腹足肌纤维变性、坏死,外套膜上皮脱落,鳃叶肿胀、血细胞浸润,肝细胞脱落、坏死,肠绒毛变短。
本文通过对患“肌肉萎缩症”的杂色鲍进行病原学和病理组织学研究,以期为杂色鲍的健康养殖和病害防治提供理论依据。