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为了研究狂犬病病毒G基因从基因组的第四位重排至第二位所具有的功能差异，本实验以反向遗传操作技术拯救出的G基因重排至第二位的病毒HEP—Flury(NIG2)为基础毒株，与亲代病毒rHEP—Flury株进行生物学特性比较。同时针对HEP—Flury株G基因及GenBank中的鼠GAPDH序列，分别设计一对TaqMan引物，将标准曲线法与2—△△Ct法相结合，建立了一种定量检测狂犬病病毒G蛋白mRNA表达量的相对荧光定量PCR方法。用该方法比较两株病毒在BHK—21细胞中G蛋白mRNA表达量，结果表明，重组病毒HEP—Flury(NIG2)G蛋白的mRNA表达量是亲代病毒rHEP—Flury的1.58倍。
比较重组病毒NIG2与亲代病毒rHEP—Flury株生物学特性研究发现：重组病毒(NIG2)在BHK—21细胞中连续传5代，病毒滴度开始呈现恒定，至第6—10代，病毒滴度达到1.0×106FFU/mL，与亲代病毒相似，两株病毒在BHK—21细胞增殖规律一致；滴度为1.0×106 FFU/mL的病毒，以MOI=0.01感染BHK—21细胞，4天后病毒滴度达到最高，第5天开始下降；根据薄层扫描分析，并通过Western blotting检测结果表明，重组病毒HEP—Flury(NIG2)G蛋白表达量高于亲代病毒rHEP—Flury株，两株病毒均可见61.5KD左右的G蛋白表达条带；MTT实验对病毒感染后线粒体呼吸作用进行检测，结果显示，细胞毒素影响病毒在细胞中的复制效率进而影响病毒的滴度，亲代病毒及重排病毒滴度均在第3天显著增高，而在第4天达到最高滴度；通过动物试验研究表明，两种毒株对成年鼠均无致死性，与rHEP—Flury株相比，重组病毒对小鼠致病性降低，免疫原性提高。
上述实验结果表明，狂犬病病毒G基因重排至第二位，其糖蛋白表达量增高，病毒毒力减弱，为研究狂犬病病毒的各基因和功能的关系奠定了基础。