新型固相微萃取涂层材料的制备及其在细胞顶空挥发性代谢物测定中的应用

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肺癌是常见的肺原发性恶性肿瘤,已经成为人类因癌症死亡的主要原因。而大气颗粒物(PM2.5)由于粒径小,容易深入肺部引发炎症和呼吸道疾病,被认为与肺癌的发生有很大关系。肺癌发病率和死亡率逐年攀升很大程度上是由于早期诊断率过低,不能及时发现病情,因此提高肺癌早期诊断率是延长患者生命的关键。以呼出气体中挥发性有机化合物(VOCs)作为肺癌潜在标志物,结合固相微萃取技术与气相色谱-质谱联用法检测,可以提供一种安全无创、有潜力的肺癌早期诊断方法,并有望建立一种大气颗粒物的环境暴露毒理学研究新策略。但无论是人体呼出气体,还是肺部组织、细胞等的呼出气体,其成分都非常复杂,将VOCs从复杂的气体基质中分离富集需要合适的样品前处理方法。固相微萃取(Solid Phase Microextraction,SPME)是一种新型样品前处理技术,其操作简单方便,无需溶剂,可与检测仪器实现联用,且集采样、萃取、富集、进样于一体,已被广泛应用于多个领域。纤维头固相微萃取只需少量萃取相便能实现目标物的富集,在气体成分检测方面应用极广。纤维头完成对目标物的萃取后,可直接在气相色谱-质谱联用仪热解析,进行分离和检测。本实验合成了氧化石墨烯/聚苯胺/聚吡咯、氧化石墨烯/聚苯胺/聚多巴胺新型固相微萃取涂层,将SPME与气相色谱-质谱联用,用于检测人胚胎成纤维细胞系(MRC-5)和PM2.5染毒的MRC-5呼出气体中的挥发性代谢物。本文主要研究内容如下:1.通过原位电沉积法在不锈钢丝上合成氧化石墨烯/聚苯胺/聚吡咯新型固相微萃取涂层,基于此材料建立了一种简单、灵敏的固相微萃取-气相色谱-质谱联用法,用于MRC-5和肺腺癌上皮细胞系顶空气体中挥发性代谢物的检测。对复合材料的表面形貌、热稳定性、使用寿命和萃取效率进行了详细考察,该材料的萃取效率优于商品化纤维头(PDMS,PDMS/DVB,PA)。对影响萃取和解析性能的条件进行了优化。在最优条件下,考察了方法的灵敏度、线性、精密度等方法学参数。该法在0.002-40 μg L-1具有良好的线性关系,检出限为1.0 ng·L-1,单根纤维的相对标准偏差在1.2-13.6%之间,不同批次纤维相对标准偏差为1.9-18.0%。应用外标法检测MRC-5和肺腺癌上皮细胞系顶空气体中的代谢物的含量,结果表明该方法简单灵敏,重现性好,可用于细胞中挥发性代谢物的研究。2.通过电沉积法在不锈钢丝上合成氧化石墨烯/聚苯胺复合材料,并在其表面进行了聚多巴胺修饰,得到新型氧化石墨烯/聚苯胺/聚多巴胺固相微萃取涂层。基于此材料,建立了一种快速、低成本、高灵敏度的固相微萃取-气相色谱-质谱联用法,用于不同浓度PM2.5染毒后MRC-5顶空气体中挥发性代谢物的检测。对复合材料的表面形貌、热稳定性、使用寿命和萃取效率做了详细考察,并对影响萃取性能和解析性能的条件进行了优化。在最优条件下,考察了方法的回收率、线性、精密度、灵敏度等参数。该法在0.001-40 μg L-1范围内线性关系良好,线性相关系数大于0.9922。单根纤维的相对标准偏差在1.1-8.4%之间,不同批次纤维相对标准偏差为0.2-11.2%,对于九种VOCs目标物,该方法的检出限为0.3 ng·L-1,回收率为84-109%。利用外标法测定不同浓度PM2.5染毒的MRC-5顶空气体中的目标物的含量,该方法灵敏高效,有望为大气颗粒物的细胞毒理学研究提供理论依据。
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