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大剂量化、放疗抑制的病人的造血功能的,依赖输血患者更需要大量新生红细胞的支持.反复红细胞输注,大大增加了患者罹患经血液传播疾病的机会.脐血是一个造血干祖细胞的丰富来源,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞.本实验旨在探讨通过脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO对CD34+细胞扩增的影响,以期日后大规模扩增的应用及注入动物胚胎产生大量红细胞作实验研究.材料和方法 1细胞来源:脐血来源于广州市第一人民医院及广东省人民医院妇产科,产妇均为足月妊娠健康产妇,分离单个核细胞.2实验方法:去粘附细胞后的单个核细胞按1×10<6>/ml按种至50ml培养瓶stemspan无血清培养液中,每瓶6ml,共分3组,分别为A为对照组、B为TPO+SCF+FL+EPO+IGF-1组、C为TPO+SCF+FL组.细胞因子终浓度分别为TPO 10ng/ml,SCF 25ng/ml,FL 25ng/ml,EPO 5U/ml,IGF-1 50ng/ml青链霉素终浓度均为100U/ml将上述体系于37℃、5％CO2及饱和湿度的培养箱中培养,3组分别于培养6、10、14天进行1/2量换液,补充相同量的培养液及相同浓度细胞因子.B组和C组在第6天及以后换液均加入终浓度5U/mlEPO和IGF-1 50ng/ml.3检测方法于培养0天、6天、10天、14天取出换液的部分细胞用于细胞计数、半固体集落测定红系祖细胞和CFU-GM的数量、流式细胞术测定细胞的CD<,34>、CD<,34>CD<,71>、CD<,71>GPA细胞的比例.3.1单个核细胞计数以2％含龙胆紫的冰醋酸液体为白细胞稀释液,细胞计数板作人工计数.3.2集落形成细胞数、红系祖细胞集落分析124孔板上采用Methocult GF H4434半固体细胞集落培养,接种细胞终浓度5×10<4>/ml,大于50个细胞桔红色集落为红系祖细胞集落,透亮细胞集落为CFU-GM、G、M.3.3流式细胞仪标记的分析进行细胞表面CD<,34>、CD<,34>CD<,71>、CD<,71>GPA分析.4统计学处理实验数据以X±SD表示,MNC、CD<,34><+>细胞数、CD<,34><+>CD<,71><+>、CD<,71><+>GPA<+>、集落形成细胞数CFC(BFU-E和CFU-GM)数均采用SPSS软件分析,统计方法为ANOVA,显著性差异为P<0.05,高度显著性差异为P<0.01.结论1脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO实现了CD34+细胞及集落形成细胞的扩增.2脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO+EPO+IGF-1短期液体培养获得红系祖细胞的扩增,在第0天比6天加入EPO获得更多红祖细胞.(P<0.05).3由于TPO+SCF+FL+EPO+IGF-1组的集落形成细胞数、CFU-E和BFU-E数于第10天最多,故培养后收获时间宜控制在其体外培养的第10天.