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该研究就冷冻卵子的成熟阶段、冻融后未成熟卵子的体外成熟、孕期来源的未成熟卵子冷冻后的发育潜能、冷冻对卵子超微结构的影响,等方面作了初步的研究,以探索冷冻卵子的成熟阶段、冻融后未成熟卵子的体外成熟的方案及孕期来源的未成熟卵子能否作为供卵的来源.材料与方法.1.标本来源.未成熟卵子取自广州市第二人民医院妇产科2003年3月至2004年3月因妇科良性肿瘤开腹手术的病人(自然周期来源)、剖宫产(孕期来源)、广州市第二人民医院生殖中心行单精子胞浆内注射术(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)患者(促排周期来源)自愿捐献的未成熟卵子,共获得213颗有效的生发泡(Germinal Vesicle,GV)期卵.成熟卵子(MetaphaseⅡ,MⅡ期)的来源有二:①由未成熟卵子经体外培养而来,共获得39颗;②来自该生殖中心行体外受精术(In vitro fertilization,IVF)的妇女捐献的成熟卵子,共获得20颗.精子来自在该生殖中心行IVF的健康男士捐献的正常精液.2.实验方法.该研究分为两个部分,第一部分:研究冷冻对不同成熟时期卵子发育潜能的影响.将不同成熟时期的卵子进行冷冻,解冻后观察体外成熟率、受精率、卵裂率,以比较冷冻对不同成熟时期卵子发育潜能的影响.该部分分为三组:未冷冻组:将GV期卵子进行体外成熟(in vitro matration,IVM)、ICSI,观察其发育潜能;GV期冷冻组:将卵子在GV期进行冷冻,解冻后,分为两组,分别用添加表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)(EGF(+)组)和未加EGF(EGF(-)组)的培养基进行IVM,再将发育到MⅡ期的卵子进行ICSI;观察其发育潜能;MⅡ期冷冻组:将GV期卵子先IVM,选择成熟的卵子再冷冻,解冻后再进行ICSI,观察其发育潜能.第二部分:观察冷冻对成熟卵子超微结构的影响.所用的卵子为人的MⅡ期卵子,来源于促排病人.该部分分为两组,未冷冻组:将新鲜的MⅡ卵子制作成电镜标本,观察超微结构;冷冻组:将MⅡ期卵子先进行冷冻,解冻后制备成电镜标本,观察其超微结构.结论:1.GV期卵子和MⅡ期卵子冷冻后均具有一定的发育潜能,但前者更能耐受冷冻,因此更适宜冷冻.2.EGF可提高解冻的GV期卵子的发育潜能.3.孕期的GV期卵子冷冻后具有一定的发育潜能,可作为卵子冷冻的来源之一.4.冷冻对成熟的人类卵子线粒体的形态及分布有一定的影响.