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由灰霉菌(Botrytis cinerea)侵染所引起的灰霉病是在果蔬种植上最为常见的一种腐烂性病害,其寄主范围广,从生产到销售均可侵染造成非常严重的经济损失。大量研究表明蛋白质乙酰化修饰方式在真核生物以及原核生物中广泛存在并且与致病力相关。前期实验室研究发现灰霉菌的致病性与蛋白质乙酰化修饰有关。蛋白质乙酰化修饰是一种普遍存在的蛋白质翻译后修饰方式,它由乙酰基转移酶和去乙酰化酶共同调控。乙酰基转移酶通过与组蛋白结合,调控下游基因的表达,从而影响灰霉菌的致病力。
本研究重点对乙酰基转移酶BcMOZ的致病性及其致病机理进行了研究,主要研究结果如下:
1.BcMOZ的基因敲除、回补以及表型测定试验。通过PEG介导的原生质体转化法得到了敲除突变体ΔBcMOZ和回补突变体ΔBcMOZ-C。结果发现,与野生型菌株相比,敲除突变体ΔBcMOZ不管是在生长速率、产孢、菌核量还是在对不同胁迫压力的敏感性方面均有明显的降低。更为明显的是,敲除突变体ΔBcMOZ在番茄叶片上的致病力以及在洋葱表皮上的侵染能力也显著降低。而回补突变体ΔBcMOZ-C在以上方面与野生型菌株相比水平相当。
2.BcMOZ乙酰化作用位点分析。为了明确乙酰基转移酶BcMOZ的具体乙酰化位点,我们首先往敲除突变体菌株中添加GFP标签获取突变体BcMOZ-GFP,然后进行Co-IP钓取互作蛋白,通过质谱分析得到乙酰基转移酶BcMOZ的互作蛋白,最后通过Westernblot实验验证,得出结论,乙酰基转移酶BcMOZ的乙酰化位点为组蛋白H4上的H4K16位点。
3.BcMOZ致病机理的测定。为了明确乙酰基转移酶BcMOZ是如何调控下游基因从而影响灰霉菌致病性的,我们对野生型菌株和敲除突变体进行了转录组分析,共检测到1118个基因,其中表达上调的基因有351个,表达下调的有767个。对下调基因与致病相关基因敲除和ChIP试验进行验证。试验结果表明,乙酰基转移酶BcMOZ通过调控下游与致病相关基因的表达水平,使菌丝不能侵入寄主体内,从而使敲除突变体的致病力下降。
本研究重点对乙酰基转移酶BcMOZ的致病性及其致病机理进行了研究,主要研究结果如下:
1.BcMOZ的基因敲除、回补以及表型测定试验。通过PEG介导的原生质体转化法得到了敲除突变体ΔBcMOZ和回补突变体ΔBcMOZ-C。结果发现,与野生型菌株相比,敲除突变体ΔBcMOZ不管是在生长速率、产孢、菌核量还是在对不同胁迫压力的敏感性方面均有明显的降低。更为明显的是,敲除突变体ΔBcMOZ在番茄叶片上的致病力以及在洋葱表皮上的侵染能力也显著降低。而回补突变体ΔBcMOZ-C在以上方面与野生型菌株相比水平相当。
2.BcMOZ乙酰化作用位点分析。为了明确乙酰基转移酶BcMOZ的具体乙酰化位点,我们首先往敲除突变体菌株中添加GFP标签获取突变体BcMOZ-GFP,然后进行Co-IP钓取互作蛋白,通过质谱分析得到乙酰基转移酶BcMOZ的互作蛋白,最后通过Westernblot实验验证,得出结论,乙酰基转移酶BcMOZ的乙酰化位点为组蛋白H4上的H4K16位点。
3.BcMOZ致病机理的测定。为了明确乙酰基转移酶BcMOZ是如何调控下游基因从而影响灰霉菌致病性的,我们对野生型菌株和敲除突变体进行了转录组分析,共检测到1118个基因,其中表达上调的基因有351个,表达下调的有767个。对下调基因与致病相关基因敲除和ChIP试验进行验证。试验结果表明,乙酰基转移酶BcMOZ通过调控下游与致病相关基因的表达水平,使菌丝不能侵入寄主体内,从而使敲除突变体的致病力下降。