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鸭疫里默氏菌是鸭等禽类的重要病原菌,呈世界性分布,鸭等禽类感染后的主要临床症状是心包炎、肝周炎和气囊炎,常常造成严重死亡。本文对鸭疫里默氏菌gldK基因进行了研究,结果如下:1.gldK基因的生物信息学分析通过对拟杆菌门IⅨ型分泌系统的分析,发现gldK基因是IⅨ型分泌系统的一个主要元件,对鸭疫里默氏菌CH-1株基因组进行分析,表明也存在相应的gldK基因,通过序列比对,发现该基因在鸭疫里默氏菌不同菌株之间保守性很高,并且有典型的脂蛋白信号肽。2.gldK基因缺失株的构建将gldK基因的上游同源臂、壮观霉素抗性基因盒和下游同源臂用融合PCR的方法进行融合,融合之后与自杀质粒pYA4278连接,转入E.coli X7213中。以E.coli X7213为供体菌,鸭疫里默氏菌CH-1株为受体菌,进行结合转移,通过壮观霉素进行筛选,结合PCR鉴定,最终获得了 gldK基因缺失株RA-CH-1△gldK。3.gldK基因回补株的构建将gldK基因用酶切连接的方法与大肠杆菌-鸭疫里默氏菌穿梭质粒pLMF02连接,转入E.coliDH5α中,提取质粒,鉴定正确后,将重组质粒转入E.coli S17-1λpir中。以E.coli S17-1λpir作为供体菌、鸭疫里默氏菌CH-1株作为受体菌,进行接合转移,通过头孢西丁进行筛选,结合PCR鉴定,最终获得了 gldK基因回补株 RA-CH-1C△gldK。4.gldK基因的功能研究以相同剂量(均为1010CFU)的亲本株、缺失株及回补株分别对10只3日龄的樱桃谷鸭进行感染,观察雏鸭一周存活情况。结果:亲本株感染鸭的存活率仅为20%,缺失株感染鸭的存活率为80%,回补株感染鸭的存活率为40%,表明gldK基因对鸭疫里默氏菌致病性有影响;通过半数致死量(LD50)测定,亲本株的LD50为1.44×108CFU,缺失株的LD50为2.25×1011 CFU,回补株的LD50为1.24×109CFU,缺失株的毒力比亲本株下降了约1.5×103倍,表明gldK基因能够影响鸭疫里默氏菌的毒力;之后又以相同剂量(均为108CFU)的亲本株、缺失株及回补株分别对3日龄雏鸭进行感染,计算血液、肝脏、脑组织的菌载量,缺失株感染鸭的心脏、肝脏和脑组织的菌液载量显著低于亲本株;在感染过后36h,采取心脏、肝脏、脑、脾脏,制作组织切片,通过HE染色,结果显示缺失株感染鸭仅肝脏出现水肿,其它器官无肉眼可见变化,而亲本株感染鸭的肝脏、心脏均出现变性坏死,脾脏炎性细胞浸润,回补株与亲本株变化相似,表明gldK基因能够影响鸭疫里默氏菌的致病性。综上:鸭疫里默氏菌gldK基因是非必须基因,也是毒力基因;缺失gldK基因的鸭疫里默氏菌仍然能够生长繁殖,但对雏鸭的致病性显著降低。