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目的:四君子汤配合化疗作用于胃肠癌,观察其是否能够增加胃肠癌对化疗药物的敏感性,并研究其作用机制。
方法:1.通过MTT法、克隆形成实验法观察四君子汤与化疗药单用及联用对胃肠肿瘤细胞的生长抑制作用。2.建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为空白组、四君子汤组、5-氟尿嘧啶组、联合组,从给药第1天开始测量裸鼠的体重和瘤体的最大长径(L)、短径(W),每周测量2次,给药3周后继续观察1周,脱颈处死后剥离瘤体称重,计算瘤体积抑制率和瘤重抑制率。3.流式细胞术、蛋白印迹法来研究四君子汤与化疗药单用及联用时,对胃肠癌化疗敏感性的影响,从细胞周期、细胞凋亡以及与凋亡相关基因的表达方面进一步阐明其作用机制。
结果:1.四君子汤药物血清作用于人胃癌细胞BGC-823、MKN-45和人肠癌细胞HCT-116、HCT-848h的抑制率分别为9.05%、7.87%、5.27%、6.41%,均低于有效抑制率(10%),而其联合化疗药LOHP对4种细胞的抑制率分别为51.43%、52.42%、51.80%、50.86%,四君子汤联合5-Fu作用48h的抑制率分别为59.65%、59.04%、54.27%、55.57%,均高于单纯化疗药组的抑制率,且以四君子汤联合5-Fu对人胃癌细胞BGC-823的抑制率最大,呈现时间、剂量依赖性。2.5%、10%、15%3种浓度的四君子汤联合化疗药5-Fu作用于人胃癌细胞BGC-823的克隆形成率分别为2.67%、1.87%、2.53%,低于单纯化疗组的6.47%(P<0.01)。3.四君子汤与5-Fu联合组裸鼠的瘤体抑制率和瘤重抑制率分别为64.06%、62.32%,均高于单纯5-Fu组抑制率(41.15%、37.42%)(P<0.05)。4.流式细胞术结果显示空白组、四君子汤组、5-Fu组、联合组G1期细胞所占百分比分别为51.33%、53.49%、73.80%、82.96%,凋亡率分别为2.5%、6.3%、10.85%、20.41%,四君子汤组高于空白组但无统计学意义,联合组与5-Fu组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。5.Western Blot法检测发现空白组、四君子汤组、5-Fu组、联合组的Bcl-2蛋白含量依次降低,而Bax的含量依次升高,Bcl-2/Bax含量亦依次减少。
结论:1.四君子汤能够提高化疗药LOHP、5-Fu对胃、肠癌细胞的敏感性,且以四君子汤联合5-Fu对人胃癌细胞BGC-823的抑制率最大,具有时间、剂量依赖性。2.四君子汤联合化疗药5-Fu能够提高裸鼠皮下移植瘤对5-Fu的敏感性。3.四君子汤联合化疗药5-Fu作用于人胃癌细胞BGC-823可通过将细胞阻滞于G1期,使之不能或延迟进入S期,从而阻滞细胞DNA的合成,进而丧失进行有丝分裂的基础来实现提高胃癌细胞对5-Fu化疗的敏感性。4.四君子汤联合化疗药5-Fu作用于人胃癌细胞BGC-823亦可通过下调凋亡相关基因Bcl-2、上调Bax的表达来增加诱导细胞凋亡,从而实现提高抑制肿瘤细胞生长、提高胃癌细胞BGC-823对5-Fu的敏感性的目的。