【摘 要】
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该研究利用基因枪法将抗除草剂BAR基因导入春小麦.在1300P.s.i轰击和和每枪0.5ug质粒DNA(pBARGUS)条件下,以不同的轰击距离(6、9、12cm)与不同金粉量(50、80、160μg/枪)轰击
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该研究利用基因枪法将抗除草剂BAR基因导入春小麦.在1300P.s.i轰击和和每枪0.5ug质粒DNA(pBARGUS)条件下,以不同的轰击距离(6、9、12cm)与不同金粉量(50、80、160μg/枪)轰击春小麦东农7742、IE47及辽10的未成熟胚.结果表明,提高金粉用量可使GUS基因瞬时表达的蓝点数增多.金粉用量为160μg/枪时,平均每个幼胚上所获得的GUS基因瞬时表达蓝点数高于50和80μg/枪的处理,且获得的抗性愈伤中GUS基因表达的蓝色较强.瞬时表达与稳定转化之间不存在相关.瞬时表达高并不意味着最终转化率高.每枪轰击所用金粉量为160μg时,在轰击的353个胚中未获得再生植株.金粉用量低则相对减少携入的外源DNA量,也不利于外源基因的稳定转化.轰击后经一周过渡培养有利于提高转化率.在相同轰击条件下,培养天数不同的幼胚对轰击的反应不同.轰击距离6cm,金粉量为80μg/枪,以培养20ˉ22天的幼胚比培养4ˉ7天的幼胚为靶材料的基因枪法转化效果优于培养4ˉ7天的幼胚.从轰击的180个幼胚中再生出12株植株,有3株呈GUS阳性并经PCR检测到BAR基因整合,转化率为1.67%.六个轰击试验中,2804个轰击幼胚经10mg/lL-PPT筛选后得到的259个抗性愈伤中有45个呈GUS阳性.GUS阳性的愈伤中GUS基因表达水平并不相同.在所获得的32株再生植株中有4株抗高达0.01%L-PPT,且经X-Gluc染色,在花药中也检测到GUS基因表达,PCR检测均呈阳性,初步认为BAR基因已经整合到这4株再生植株的基因组中,而在对照和其他再生植株中未发现GUS基因表过和BAR基因整合.
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