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目的:目前,癫痫发作的众多病因当中,谷氨酸受体兴奋所引起的神经元凋亡是其分子机制之一。故海人藻酸受体作为癫痫相关度较高的离子型兴奋性谷氨酸受体的一种引起了实验组的注意,而其下游蛋白特别是procaspase-3去亚硝基化更是与神经元凋亡的具体机制密切相关.影响procaspase-3的活化和去亚硝基化的物质是否对海人藻酸引起的神经元凋亡有保护作用以及这些物质是否有可能用于临床治疗均未可知。
方法:侧脑室注射海人藻酸构建Sprague-Dawley大鼠癫痫模型,再分别给予GSNO,硝普钠,FasLAS-ODN,金诺芬,NS102。主要运用Biotin-Swich Assay,SDS-PAGE、免疫印迹、免疫沉淀、免疫组织化学方法对蛋白质亚硝基化以及蛋白与蛋白之间的而相互作用进行研究:应用焦油紫染色方法检测海马神经元的存活与死亡,应用Tunel染色方法检测海马神经元的凋亡。
结果:
1.KA受体激动剂海人藻酸通过特异地激活KA受体激活海马CA1、CA3/DG区procaspase-3。
2.KA受体亚型GIuR6介导了受体偶联的procaspase-3去亚硝基化。
3.GSNO和SNP可抑制KA诱导的引起的procaspase-3去亚硝基化和激活。
4.FasL反义寡核苷酸可抑制KA诱导引起的procaspase-3去亚硝基化和激活。
5.Auranofin可抑制KA诱导的引起的procaSpase-3去亚硝基化和激活。
6.免疫组化的结果进一步揭示了procaspase-3去亚硝基化和激活所涉及的相关机制。
7.焦油紫染色的结果表明抑制procaspasc-3去亚硝基化和激活具有抗KA诱导的海马神经元迟发性死亡作用。
8.TUNEL染色的结果进一步证实了焦油紫染色的结果。
结论: KA刺激引起的FasL表达增加可能通过特异性受体激活Trx-TrxR系统来促进porcaspse-3的去亚硝基化和活化,导致神经元细胞凋亡。亚硝基化供体可能通过抑制procaspse-3的去亚硝基化实现神经元保护作用。