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室内尘埃中邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)等污染物与儿童哮喘及其他过敏性炎症性疾病相关,探究DEHP相关炎症性疾病的发病机制并寻找天然植物药进行预防和治疗是人们关注的焦点。
本文采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)——一种参与免疫调节与炎症反应的细胞模型,来研究DEHP的免疫毒性。首先用MTT法考察细胞活力,进一步利用实时定量RT-PCR、ELISA、Western Blot等方法从转录和翻译水平探讨炎症相关基因与蛋白的表达,用溶酶体红色荧光探针标记法分析DEHP刺激不同时间内ICAM-1蛋白合成的分子机制,利用钙黄绿素-AM染色法研究HUVECs与THP-1单核细胞间的粘附性。主要结论如下:
1)DEHP暴露引起HUVECs细胞中炎症相关基因和蛋白表达改变。低浓度DEHP(0.05-25μmol/L)诱导ICAM-1、IL-6和IL-8基因和蛋白表达上调。
2)DEHP经溶酶体途径急性诱导(15～30分钟)ICAM-1蛋白表达,而经过转录与翻译途径慢性诱导(8小时)ICAM-1蛋白表达、需要更始蛋白的合成。
3)DEHP促进单核细胞与HUVECs细胞间粘附性增加。
在此,我们还考察了具有抗炎效果的典型天然多酚类化合物——姜黄素和芹黄素对DEHP介导炎症反应的消减作用,以及对炎症相关通路的调控作用。主要结论如下:
1)姜黄素通过ERK/MAPK和p38/MAPK路径抑制DEHP诱导的ICAM-1和IL-8表达。
2)芹黄素通过JNK/MAPK路径抑制DEHP诱导的ICAM-1、IL-6和IL-8表达。
3)姜黄素和芹黄素抑制DEHP引起的单核细胞与HLIVECs细胞间的粘附性。另外,我们以BALB/c小鼠为模型研究了芹黄素对快速过敏性诱导剂Compound48/80引起的小鼠过敏性休克死亡的抑制作用与机制。得到如下结论:
1)芹黄素有效抑制Compound48/80诱导的小鼠过敏性休克死亡。
2)芹黄素抑制Compound48/80诱导的小鼠血清中IL-6、IL-8及ICAM-1蛋白的表达。
3)JNK路径抑制剂SP600125抑制Compound48/80诱导的小鼠血清中IL-6及IL-8蛋白的表达。
这些结果表明,DEHP可能通过诱导炎症反应,进而损害免疫系统,从而引发哮喘等炎症性疾病。姜黄素和芹黄素对DEHP相关炎症性疾病有控制作用,调节炎症信号通路是其可能的作用机理之一。本研究可为免疫抑制的新药开发和应用提供理论依据。