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鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)引起的一种重要的传染性呼吸道疾病，对世界养禽业造成了巨大的经济损失。IBV变异速度快，血清型较多，且各血清型之间没有较好的交叉保护性，因此对IBV变异毒株的分子遗传机制及其致病性进行分析，有助于查明IB爆发的原因，也可为研究IBV致病机理及IB的防控提供数据。 本研究中，首先通过比对不同IBV的M基因序列，选取相对保守的第61～186位核苷酸作为扩增的靶基因，设计并合成引物，建立了IBV M基因检测的Real-time PCR方法。该方法的最低检测浓度为102copies/μL，可有效鉴别检测IBV与NDV、IBDV、IAV等其他禽源病毒，组内变异系数为0.03％～1.305％，组间变异系数为0.602％～2.339％（均小于3％），表明该方法具有较高的灵敏度、特异性和稳定性。 在建立了可以有效应用于IBV核酸检测的Real-time PCR的基础上，以于同一时间在浙江金华地区分离的两变异株JH06011和JH06111为研究对象，开展不同毒力IBV毒株致病性比较分析。以相同剂量(6.3×106copies)的JH06011和JH06111毒株分别感染14日龄、21日龄和28日龄的SPF鸡，观察和分析两毒株感染鸡在临床症状、外界排毒、病理损伤、组织病毒载量、抗体水平等方面的差异。实验数据显示，JH06111与JH06011感染鸡，在感染后的3～4天均出现精神沉郁，采食和饮水明显减少，羽毛蓬松，有典型的呼吸症状，呼吸急促，伸颈呼吸，甩头等症状，但JH06111感染鸡相较于JH06011感染鸡的临床症状表现略轻;在感染后的第7～9天，JH06011与JH06111试验组的排毒量达到峰值，排毒高峰持续2～3天开始下降;JH06011感染鸡只出现死亡，14日龄、21日龄和28日龄的SPF鸡的平均死亡率分别为:77.5％，65％，65％。剖检JH06011组病死鸡可以观察到肾脏有典型的“花斑肾”样病变，部分死亡鸡气管内有大量黏液;而JH06111组没有雏鸡死亡，JH06111试验组雏鸡的肾脏只是出现轻微的肿大，其他病变不明显;取JH06011和JH06111组14日龄的感染鸡做病理切片和免疫组化观察发现，JH06011感染雏鸡的肾小管严重扩张，大部分肾小管上皮细胞变性、坏死和脱落，局部有淋巴细胞浸润;JH06111组感染鸡则没有明显的肾小管扩张现象，只有少量淋巴细胞的浸润;JH06011和JH06111感染鸡的肾脏、肺脏中均可以观察到IBV病毒的存在，且JH06111感染鸡在肾脏、肺脏中的病毒含量明显多于JH06111感染鸡;通过Real-time PCR测定两个试验组的各组织脏器的病毒载量发现，病毒在肾脏中含量最高，而气管和肺脏中含量相对较少;此外，利用ELISA方法检测不同日龄感染雏鸡的血清抗体水平发现，抗体的产生开始于攻毒后的6天～9天，然后抗体水平不断增加，达到峰值，在整个试验期间（28天），JH06011和JH06111感染鸡的血清抗体持续存在，但两组间的血清抗体效价不存在明显差异。