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狂犬病是人类最古老的疾病之一，也是当前世界上流行最广，危害最严重的人兽共患传染病，它是由狂犬病毒及狂犬病相关病毒引起的，能感染几乎所有的温血动物，患病动物一旦发病几乎百分之百死亡，据WHO的最新统计，全球每年因狂犬病死亡的人数约为3.5～5.0万人，而造成家畜和其它动物死亡的损失更是无法估量。近年来随着分子生物学和免疫学的发展和应用，对狂犬病毒的结构、基因序列及其主要功能以及发病机理和免疫机制等都有了新的认识和了解，使得防控狂犬病有据可依，其中对狂犬病毒核蛋白的研究也在不断地深入。实验证明：狂犬病毒核蛋白在各毒株之间基因序列高度保守，可用于狂犬病毒的检测、基因分型以及研制核酸疫苗等。 本实验以测定狂犬病鼠源野毒株(MRV)的N基因序列为主要研究内容，目的在于研究MRV株的分子生物学特性，探讨其基因型与现用狂犬病疫苗株N基因的差异和关系，为研制有效的常规疫苗和基因疫苗、诊断试剂及全基因序列的测定提供有关数据。本研究应用成熟的RT-PCR技术，根据已发表的狂犬病毒PV株基因序列设计了一对引物，对狂犬病野毒MRV株核蛋白全基因进行了扩增，而后将目的片段与T载体相连并转入DH5α，获得了重组载体。将其命名为pGEM-T／NP，应用DNAStar的Meghlign软件将目的片段的测序结果与已发表的几株狂犬病毒CVS、8202、CTN、ERA、HEP-flury、PV、RC-HL、SADB19及Mokola株进行比较分析，结果表明MRV株与CVS株的核苷酸和氨基酸的同源性最高，分别为99.8％和99.6％，两者均属于同一个基因型，为基因Ⅰ型并在同一个亚型之中。此外，比较发现各毒株抗原位点除Mokola株抗原位点与各毒株差异较大外，其它各毒株均略有差异，MRV株与CVS株的四个抗原位点完全相同，但是它们的抗原位点Ⅰ中的第377位氨基酸由苏氨酸(T)变成了丝氨酸(S)；而8202株的抗原位点Ⅱ中第79位氨基酸由谷氨酰胺(Q)变成了谷氨酸(E)；CTN的抗原位点Ⅱ中第90位氨基酸吉林农业大学硕士学位论文狂犬病鼠源野毒M株核蛋白基因克隆与序列分析由苏氨酸(T)变成了(N)这些变化可能会影响到核蛋白的空间结构和免疫原性，于是本实验又对蛋白质的二级结构和疏水性进行了预测，进一步证实了各狂犬病毒株的核蛋白是稳定、保守的，适合于制备各种疫苗。