PRGL基因转化非洲菊的研究

• 作 者: 王小解
• 机 构: 华南师范大学
• 出 处: 华南师范大学
• 发表日期: 2011年期
• 关键词: 非洲菊 叶柄转化法 抗性筛选 PRGL基因 转基因苗

植物转基因技术为研究植物基因的功能提供了重要方法。在非洲菊中,因愈伤分化成芽的概率较低,国内还没有成功的转化方法的报道。建立高效的转化方法对研究非洲菊基因的功能具有重要意义。本实验室已建立论文非洲菊单芽转化体系,获得了3株PRGL基因反义转化植株,但转化效率很低。本论文在此基础上,做进一步的技术改进。以大田生长的非洲菊和试管苗为材料,通过反复摸索,建立了一种高效稳定的农杆菌介导转化非洲菊的方法,并获得了PRGL基因超表达植株。主要结果如下:　　
1.尝试了三种外植体转化方法:单芽法,叶柄法和叶柄切段法。分别以单芽,预培养5-7d的叶柄和切段的叶柄为外植体。单芽法共侵染了320个外植体,未获得转化植株,转化效率为0。叶柄法共侵染了3027个外植体,转化效率为2.46％。叶柄切段法共侵染了1124个外植体,转化效率为0.35％。经比较,叶柄法和叶柄切段法均能够得到转基因苗,而叶柄法的转化效率明显高于叶柄切段法。　　
2.在非洲菊转化中,卡那霉素(Kan)作为筛选抗生素优于潮霉素(Hyg)。在叶柄法转化实验中发现,在两种筛选压下,非洲菊外植体在筛选培养基上都能产生抗性芽。但在Hyg筛选培养基的抗性芽很快(14 d左右)就褐化死亡,无法继续生长。而在Kan的筛选培养基上的抗性芽可以正常生长,分化出新芽,并且能够扩繁。说明在非洲菊转化中,Kan比Hyg更宜作为筛选抗生素。　　
3.采用农杆菌介导的叶柄转化法,将PRGL载体和干涉PRGL载体转入非洲菊中。获得40多个超表达PRGL拟转化株系和1个干涉PRGL拟转化株系。经PCR鉴定,有8个超表达拟转化株为阳性,经Southern blot鉴定,确认其中4株为阳性。其中1个株系经RT-PCR分析,与野生型比较,其表达量有所提高,其它株系有待鉴定。　　
4.对转基因苗进行初步的表型分析发现超表达PRGL可以促进非洲菊根和新生芽的伸长。　　
综上所述,我们获得了一种高效稳定的非洲菊叶柄转化方法,并获得了PRGL超表达的转基因植株。