真空冷冻干燥保存兔角膜的实验研究

• 作 者: 陈晓隆
• 机 构: 中国医科大学
• 出 处: 中国医科大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 真空冷冻干燥 角膜保存 内皮细胞功能 角膜移植 活体组织检查

目的:
目前角膜疾病仍然是主要致盲眼病之一，角膜移植是治疗因角膜病致盲的主要手段，角膜移植的开展有赖于眼库角膜保存技术的发展。为了探讨长期保存角膜的方法，进行了真空冷冻干燥保存兔角膜的实验研究。确立真空冷冻干燥角膜过程中的压力和温度与时间的工艺曲线参数；从形态和功能上对真空冷冻干燥保存的角膜及角膜内皮细胞进行检测；采用真空冷冻干燥保存的角膜进行穿透性角膜移植，进一步确定角膜内皮细胞的功能。真空冷冻干燥保存角膜可能会成为一种较为理想和长期的角膜移植材料的保存方法，对于眼库的建立和角膜移植手术的普及和发展，发挥一定的积极促进作用。
方法:
第一部分采用不同的压力与时间和温度与时间的工艺曲线真空冷冻干燥和保存兔角膜，根据传热传质计算分析和角膜形态及功能的检测，确定较为理想的工艺曲线。
第二部分按照变幅值变周期循环压力法冻干工艺曲线真空冷冻干燥兔角膜；对真空冷冻干燥保存的兔角膜，进行角膜大体观察和裂隙灯检查，角膜内皮细胞活性检测，角膜活体组织检查，角膜超微结构的检测，以确定角膜的完整性、透明性，内皮细胞密度，存活率及形态和结构。从形态和功能上全面评价真空冷冻干燥保存的兔角膜。
第三部分采用真空冷冻干燥保存的兔角膜进行兔的穿透性角膜移植，观察角膜移植片的状况，进一步确定角膜内皮细胞的功能。
结果:
第一部分变幅值、变周期循环压力法冻干角膜压力-时间及温度与时间关系曲线，具体循环过程为：冻干室内温度到-25℃，真空度为50Pa时，开始第一次循环，温度每升高5℃循环一次，循环5个周期，温度达到0℃时，循环停止。
第二部分真空冷冻干燥和保存的兔角膜复水后角膜上皮及内皮光滑完整，角膜无水肿，透明。角膜内皮细胞密度为(2339±205.73)个/mm2，存活率78.71％。角膜结构完整，各层清晰。内皮细胞表面完整，界限清晰，细胞核完整，细胞间连接良好。
第三部分对真空冷冻干燥保存的角膜行穿透性角膜移植，术后一个月时，70％角膜植片与植床连接处轻度水肿，但角膜植片均透明。部分出现虹膜前粘连及角膜新生血管，30％的角膜植片及植床出现混浊。
结论:
真空冷冻干燥兔角膜的主要参数为循环压力幅值、循环周期，变幅值、变周期的循环压力法适用于兔角膜的冻干。
真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持整个角膜结构的完整性及角膜内皮细胞的活性。
真空冷冻干燥保存的兔角膜行穿透性角膜移植，在手术后一个月时部分角膜移植片透明，角膜移植片的内皮细胞功能较好。