【摘 要】
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5-羟基色氨酸（5-HTP）作为人体神经代谢途径中抵抗抑郁情绪、缓解情感性精神障碍的天然药物替代品，近年来其市场需求越来越大。与以往的从加纳籽中提取的方法相比，通过人工合成方
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5-羟基色氨酸（5-HTP）作为人体神经代谢途径中抵抗抑郁情绪、缓解情感性精神障碍的天然药物替代品，近年来其市场需求越来越大。与以往的从加纳籽中提取的方法相比，通过人工合成方法将更加的环保与高效。在合成5-羟基色氨酸的方法中，生物法是性价比最高的，同时也是鲜有报道的新方法。本实验通过克隆人类的色氨酸羟化酶-2（TPH-2）基因，选用pET-28a、pET-PK、pPICZαA、pPIC3.5K四种质粒和大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌及毕赤酵母三种菌，共成功构建了重组大肠杆菌pET-28A-TPH-2/BL21、重组肺炎克雷伯杆菌pET-PK-TPH-2/k.p、毕赤酵母工程菌pPICZαA-TPH-2/GS115、pPIC3.5K-TPH-2/GS115四株重组工程菌。重组工程菌构建成功后，分别采用不同的表达策略，测出工程菌生产重组蛋白色氨酸羟化酶-2的能力。其中测得重组大肠杆菌在IPTG诱导后表达出蛋白并没有活性。pET-PK-TPH-2/k.p在甘油途径代谢中表达出的相应大小的色氨酸羟化酶-2也没有活性。毕赤酵母工程菌pPICZαA-TPH-2/GS115在甲醇的诱导下第168h产生色氨酸羟化酶-2，酶活约等于12.7U。毕赤酵母工程菌pPICZαA-TPH-2/GS115产出的色氨酸羟化酶-2具有一定的酶活，催化产生2.18μg/mL的5-羟基色氨酸。实现了5-羟基色氨酸的生物法制取。
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