【摘 要】
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目的:研究杨梅苷(Myr)对NK-92细胞活性的调节作用及其作用机制。方法:除正常组外,不同浓度杨梅苷(5、10、20μM)分别培养NK-92细胞,以脂多糖(LPS)作为阳性对照药。采用MTT法
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目的:研究杨梅苷(Myr)对NK-92细胞活性的调节作用及其作用机制。方法:除正常组外,不同浓度杨梅苷(5、10、20μM)分别培养NK-92细胞,以脂多糖(LPS)作为阳性对照药。采用MTT法观察不同浓度杨梅苷对NK-92细胞增殖的影响;以人慢性髓原白血病细胞(K-562)、人肝癌细胞(SMMC-7721)、肝星状细胞(HSCs-T6)为靶细胞,考察杨梅苷对NK-92细胞杀伤活性的影响;ELISA试剂盒测定NK-92分泌细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的变化;采用流式细胞仪检测NK-92细胞杀伤分子穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gz-B)、Fas配体(Fas L)表达的变化;NK-92细胞表型CD56、CD16、CD25、CD69表达的变化;NK-92细胞表面活化受体NCR1、NCR2、NCR3表达的变化;Western blot检测Syk/ZAP70酪氨酸激酶信号传导通路中Syk、ZAP70、p-Syk、p-ZAP70表达的变化;MTT法观察杨梅苷对环磷酰胺(CTX)和白细胞介素-15(IL-15)调节NK-92细胞增殖活性的影响。结果:培养36、48 h后,杨梅苷可明显增强NK-92细胞的增殖活性(P<0.05)。在效靶比5:1、10:1下,中、高剂量组杨梅苷可显著提高其对K-562、HSCs-T6细胞的杀伤活性(P<0.01),在效靶比15:1、10:1下,杨梅苷可显著升高其对SMMC-7721细胞的杀伤活性(P<0.01)。杨梅苷也能提高细胞因子IFN-γ、TNF-α的含量(P<0.01),且有一定的剂量依赖性。同时杨梅苷能增强杀伤分子PFP和Gz-B的表达(P<0.05),增强NK-92细胞表型CD56、CD25和活化受体NCR2的表达,上调Syk、ZAP70蛋白的磷酸化(P<0.01)。此外,CTX能抑制NK-92增殖而IL-15能促进NK-92细胞增殖(P<0.01),杨梅苷均可显著提高CTX抑制的NK-92细胞增殖活性,促进IL-15活化的NK-92细胞增殖(P<0.01)。结论:杨梅苷能明显增强NK-92细胞的增殖和杀伤活性,促进细胞因子分泌,其机理可能与提高其杀伤分子、表型和活化受体的表达、激活Syk/ZAP70酪氨酸激酶信号通路有关。同时杨梅苷对CTX抑制NK-92细胞的增殖活性有拮抗作用,而对IL-15促进NK-92细胞的增殖有协同作用。
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