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目的:
1.对广西产地钱(地钱Marchantia polymorpha L.;拳卷地钱Marchantia convolute Gao et Chang.;粗裂地钱Marchantia paleacea Bert.进行分子生药学鉴别。
2.对广西产地钱(地钱Marchantia polymorpha L.;拳卷地钱Marchantia convolute Gao et Chang.;粗裂地钱Marchantia paleacea Bert.进行电子显微镜显微鉴别。
3.对广西产地钱(拳卷地钱Marchantia convolute Gao et Chang.提取物总黄酮)进行急性毒性的实验。
4.提供广西产地钱分子生药学以及电镜显微等实验方法和手段,进一步完善广西产地钱生药学鉴别依据,为开发利用广西产地钱药用资源打下基础。
方法:
1.对广西产地钱进行实地调研和国内外文献系统查阅、整理、分析、归纳形成综述(附后)。
2.对广西产地钱Marchantia polymorpha L.,拳卷地钱Marchantiaconvolute Gao et Chang.,粗裂地钱Marchantia paleacea Bert.进行了分子生药学鉴定,利用分子生药学技术对地钱的DNA基因组的多态性进行分析,借助相关的计算机软件进行各品种之间UPGMA的分析。
3.采用扫描电镜对广西产地钱进行生药学鉴别。
4.对广西产地钱(拳卷地钱提取物总黄酮)进行急性毒性的实验。
结果:
1.文献检索表明,目前虽然发现对广西产地钱有采用性状、显微、理化、紫外光谱、TLC的鉴别方法,但是还没有发现应用分子生药学技术对地钱的遗传差异性进行生药鉴别的相关报道。
2.运用分子生药学理论与技术鉴定,建立了适合地钱的PCR-PAPD反应体系,筛选了鉴定的方法。利用RAPD技术从分子水平来探寻其遗传学上的差异,随机选择了46条引物,从中筛选出了22条重复性好、谱带清晰、能体现不同产地的地钱差异的引物进行扩增。从下表2-6的谱带统计结果可得到如下信息:22条有效引物共扩增出145条谱带,其中多态带有128条,占扩增总带数的88.3%。例如基因组指纹图谱(s106引物)显示广西产地钱(三个样品地钱、拳卷地钱、粗裂地钱)均产生了一条分子量相同的谱带,拳卷地钱和粗裂地钱还产生例外特征明显的谱带,从可以将广西产的三种地钱鉴别出来。
3.采用扫描电镜可有效鉴别广西产地钱的三个样品,依照地钱细胞网格比较明显,略呈多纹状;拳卷地钱细胞网格不明显,气孔数多;粗裂地钱细胞网格不明显,气孔数较少,表皮有附属物的显微特征可以鉴别出广西产地钱的三种地钱。
4.急性毒性实验结果表明以拳卷地钱提取物总黄嗣进行小鼠灌胃给药,计算出小鼠日最大耐受量相当于成年人临床日剂量的525倍。表明拳卷地钱提取物总黄酮口服是安全的。
结论:
1.提供的分子生药学技术在中药鉴定中的运用。
2.利用分子生药学技术有效地鉴别广西产地钱(地钱;拳卷地钱;粗裂地钱)。
3.采用扫描电镜技术,对广西产地钱(地钱;拳卷地钱;粗裂地钱)进行显微鉴定。
4.提供了广西产地钱(拳卷地钱总黄酮提取物)急性毒性实验,结果(最大耐受量相当于成年人临床日剂量525倍)表明拳卷地钱总黄酮提取物口服是安全的。
本论文研究内容经科技查新证实,目前尚未见与上述特点相同的文献报道。以上实验研究填补了广西产地钱研究领域的空白,为开发利用广西产地钱资源打下了基础。