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目前，辅助生殖技术(Assisted reproductive technology，ART)在全球范围内被广泛应用，全球借助ART出生的新生儿占全世界总人口的0.1%，且在未来持续增长。随着ART子代数量的增加，研究者们更加关注ART的安全性。早期的研究认为ART是安全的，然而，最近的研究发现ART妊娠期高血压、妊娠期糖尿病、早产、前置胎盘、胎盘早剥、胎膜早破、低出生体重等围生期并发症增加。有研究指出，由于不孕夫妻本身存在内分泌紊乱、代谢异常等不利因素，造成ART不良妊娠结局是很大程度上取决于不孕本身因素。然而，目前越来越多的文献证实了ART使表观遗传学发生改变，造成胎盘印记基因甲基化缺失，提示辅助生殖技术胎盘形态及功能异常可能是造成围生期以及长期子代安全性的重要因素。
胎盘是孕期母儿物质交换的重要场所，在妊娠过程中维持胎儿生长并保护胎儿免受外界伤害。胎盘功能取决于胎盘大小，形态，血流量，营养物质的转运能力。胎盘微血管的生成及其网络构建是母儿物质交换的重要保证。胎盘血管发育异常，将会导致胎儿宫内生长受限、早产、流产、妊娠期高血压等一系列并发症。我们假设ART操作中的超促排、胚胎体外培养等步骤可造成胎盘形态异常、功能受损，并可能通过遗传调控机制影响胎盘形态及胎盘功能。
既往文献指出，人类ART胎盘绒毛减少、钙化比例增加以及血管数量和直径的改变，甚至蛋白质组学发现胎盘转运功能受损，超微结构也存在微小差异，但这些改变尚有争议。动物模型中，排除了年龄、产次、孕周、地域、人为增加ART孕妇营养及不孕本身等因素的影响，更好地反应ART本身对胎盘和胎鼠早期发育的影响。而由于种属特异性，动物模型不能完全代表人类研究，研究ART胎盘结构的改变，更有利于解决临床实际问题，尽量减少ART围产期及长期并发症，提高ART安全性。
第一部分：体外受精．胚胎移植对人类足月妊娠胎盘形态、胎盘血管的影响
目的
通过搜集人类足月妊娠分娩的胎盘，研究体外受精一胚胎移植(In vitro fertilization embryo transfer，IVF-ET)胎盘光镜下大体形态结构、胎盘血管及其透射电镜下超微结构的改变，并探讨其临床意义。
资料与方法
研究对象：搜集经郑州大学第三附属医院女方因“输卵管因素”行IVF-ET治疗后单胎妊娠、孕37-42周、无妊娠并发症、择期行剖宫产分娩的胎盘6例，选择严格匹配的自然妊娠组10例为对照组，匹配参数包括产次、孕龄、性别、新生儿出生体重等。
研究方法：光镜下观察两组胎盘中大体结构，包括合体滋养细胞、细胞滋养细胞、绒毛血管、绒毛间质以及间质中是否存在纤维素沉积等；超微结构观察的包括合体滋养细胞基底膜厚度、血管内皮细胞基底膜厚度以及胎盘屏障厚度、合体滋养细胞顶端微绒毛的差异，并探讨其临床意义。
统计学方法：采用SPSS21.0统计软件。两组之间比较时，正态分布的计量资料采用t检验，结果以均值±标准差((x)±s)表示，计数资料用(%)表示，采用(？2)检验；非正态分布的计量资料采用中位数(四分位数间距)表示，采用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
(1)光镜下观察，IVF组胎盘大体结构上未见明显差异，两者均具有合体滋养细胞、细胞滋养细胞以及绒毛间质中少量的纤维素沉积；IVF组胎盘血管总数增加(514.50+86.4；667.0+125.8)，差异有统计学意义(P=0.012)、血管直径呈增加趋势(11.50+2.37；12.64+2.79)，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
(2)透射电镜下观察，IVF组胎盘屏障厚度(3379.4+1080.6；3749.0+1514.0)、合体滋养细胞基底膜厚度(60.2+15.9；66.2+17.5)、血管内皮细胞基底膜厚度(103.5+21.9；104.2+23.4)均有所增加，但差异均无统计学意义(P＞0.05)；ART组部分视野中可见到合体滋养细胞顶端微绒毛减少甚至缺失。
结论
(1)IVF-ET组胎盘大体形态与自然妊娠组胎盘无显著差异，但胎盘血管数量显著增加，且血管直径呈增加趋势。
(2)IVF-ET组超微结构与自然妊娠组胎盘存在差异，表现为胎盘屏障厚度呈增加趋势，伴随胎盘微绒毛减少。
第二部分：体外受精一胚胎移植对小鼠胎盘效率和胎鼠宫内生长发育的影响
目的
本研究采用小鼠模型，探讨体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)体外操作过程对小鼠胎盘发育及胎鼠宫内发育的影响。
资料与方法
研究对象：本研究采用6至8周龄CD1雌性小鼠及8至10周龄CD1雄性小鼠(均购自本校实验动物中心)，交配雄鼠20只，绝育雄鼠15只，供精雄鼠15只，供卵雌鼠160只，假孕雌鼠97只。由河南省农业科学院进行恒温饲养，雌性小鼠集群饲养，雄性小鼠单独饲养，12小时白天/12小时黑夜循环，自由饮食。该研究已通过“郑州大学第三附属医院伦理委员会”的审查。(批准号:LA-2017-03)
研究方法：选择6-8周龄的CD1小鼠分为3组，分别为：(1).雌性小鼠与雄性小鼠自然交配组(SC组)；(2).雌性小鼠与雄性小鼠体内受精，受精卵体外培养组(IVC组)；(3).雌性小鼠与雄性小鼠体外受精，体外培养组(IVF组)进行研究。胚胎发育的第10.5天，第14.5天以及第18.5天(即妊娠的早、中、晚孕期)，收集胎盘和胎鼠，比较三组小鼠的妊娠率、流产率，观察胎鼠宫内生长及胎盘发育。
统计学方法：采用SPSS21.0统计软件。三组间比较时，符合正态分布的计量资料用均值±标准差((x)±s)表示，行单因素方差分析。三组间两两比较时，若具有方差齐性，用LSD法，若方差不齐，用Tamhanes，sT2法，计数资料用(%)表示，采用(？2)检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
(1)妊娠早期(E10.5)，IVC组与IVF组小鼠妊娠率(32.5%，38.2%)低于SC组(56.5%)((P=0.012；P=0.014)，流产率(34.5%，45.2%)高于SC组(12.1%)，(P=0.000；P=0.000)，而IVC与IVF组间无统计学差异(P＞0.05)。
(2)妊娠中期(E14.5)，IVC组与IVF组胎鼠重量[(195.4±26.2)g，(221.5+32.6)g]低于SC组[(322.2±26.9)g](P=0.000；P=0.000)、胎盘效率(1.4±0.2，1.6±0.4)低于SC组(2.5±0.3)((P=0.000；P=0.000)，IVC组胎鼠重低于IVF组(P=0.006)、胎盘效率无统计学差异(P＞0.05)。
(3)妊娠晚期(E18.5)，IVC组与IVF组胎鼠重[(743.1±35.6)g，(617.7±29.8)g]低于SC组[(883.1±53.2)g](P=0.00；P=0.00)，胎盘效率(3．O+0.4，2.0+0.1)低于SC组(4.9±0.5)(P=0.00；P=0.00)，IVC组胎鼠重、胎盘效率均高于IVF组，差异有统计学意义(P=0.000；P=0.000)。
(4)纵观整个孕期后发现：妊娠早期，三组胎鼠重无统计学差异(SC组、IVC组、IVF组胎鼠重分别为：12.6±1.1；12.5±0.9；12.7±1.4)；妊娠中期，IVC组与IVF组胎鼠重低于SC组(P=0.000；P=0.000)，且IVC组体重低于IVF组，差异有统计学意义(P=0.006)；妊娠晚期，IVC组与IVF组胎鼠重均低于SC组(P=0.000；P=0.000)，且IVF组胎鼠重低于IVC组，差异有统计学意义(P=0.000)。
结论
(1)体外受精-胚胎移植可能造成小鼠早孕期妊娠率降低、流产率增加。
(2)体外受精-胚胎移植可能造成中晚孕期胎鼠重量下降，胎盘重量增加，胎盘效率降低。
(3)体外受精-胚胎移植可能造成胎鼠中晚孕期生长速度加快，以及孕期胎鼠宫内生长轨迹的改变。
胎盘是孕期母儿物质交换的重要场所，在妊娠过程中维持胎儿生长并保护胎儿免受外界伤害。胎盘功能取决于胎盘大小，形态，血流量，营养物质的转运能力。胎盘微血管的生成及其网络构建是母儿物质交换的重要保证。胎盘血管发育异常，将会导致胎儿宫内生长受限、早产、流产、妊娠期高血压等一系列并发症。我们假设ART操作中的超促排、胚胎体外培养等步骤可造成胎盘形态异常、功能受损，并可能通过遗传调控机制影响胎盘形态及胎盘功能。
既往文献指出，人类ART胎盘绒毛减少、钙化比例增加以及血管数量和直径的改变，甚至蛋白质组学发现胎盘转运功能受损，超微结构也存在微小差异，但这些改变尚有争议。动物模型中，排除了年龄、产次、孕周、地域、人为增加ART孕妇营养及不孕本身等因素的影响，更好地反应ART本身对胎盘和胎鼠早期发育的影响。而由于种属特异性，动物模型不能完全代表人类研究，研究ART胎盘结构的改变，更有利于解决临床实际问题，尽量减少ART围产期及长期并发症，提高ART安全性。
第一部分：体外受精．胚胎移植对人类足月妊娠胎盘形态、胎盘血管的影响
目的
通过搜集人类足月妊娠分娩的胎盘，研究体外受精一胚胎移植(In vitro fertilization embryo transfer，IVF-ET)胎盘光镜下大体形态结构、胎盘血管及其透射电镜下超微结构的改变，并探讨其临床意义。
资料与方法
研究对象：搜集经郑州大学第三附属医院女方因“输卵管因素”行IVF-ET治疗后单胎妊娠、孕37-42周、无妊娠并发症、择期行剖宫产分娩的胎盘6例，选择严格匹配的自然妊娠组10例为对照组，匹配参数包括产次、孕龄、性别、新生儿出生体重等。
研究方法：光镜下观察两组胎盘中大体结构，包括合体滋养细胞、细胞滋养细胞、绒毛血管、绒毛间质以及间质中是否存在纤维素沉积等；超微结构观察的包括合体滋养细胞基底膜厚度、血管内皮细胞基底膜厚度以及胎盘屏障厚度、合体滋养细胞顶端微绒毛的差异，并探讨其临床意义。
统计学方法：采用SPSS21.0统计软件。两组之间比较时，正态分布的计量资料采用t检验，结果以均值±标准差((x)±s)表示，计数资料用(%)表示，采用(？2)检验；非正态分布的计量资料采用中位数(四分位数间距)表示，采用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
(1)光镜下观察，IVF组胎盘大体结构上未见明显差异，两者均具有合体滋养细胞、细胞滋养细胞以及绒毛间质中少量的纤维素沉积；IVF组胎盘血管总数增加(514.50+86.4；667.0+125.8)，差异有统计学意义(P=0.012)、血管直径呈增加趋势(11.50+2.37；12.64+2.79)，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
(2)透射电镜下观察，IVF组胎盘屏障厚度(3379.4+1080.6；3749.0+1514.0)、合体滋养细胞基底膜厚度(60.2+15.9；66.2+17.5)、血管内皮细胞基底膜厚度(103.5+21.9；104.2+23.4)均有所增加，但差异均无统计学意义(P＞0.05)；ART组部分视野中可见到合体滋养细胞顶端微绒毛减少甚至缺失。
结论
(1)IVF-ET组胎盘大体形态与自然妊娠组胎盘无显著差异，但胎盘血管数量显著增加，且血管直径呈增加趋势。
(2)IVF-ET组超微结构与自然妊娠组胎盘存在差异，表现为胎盘屏障厚度呈增加趋势，伴随胎盘微绒毛减少。
第二部分：体外受精一胚胎移植对小鼠胎盘效率和胎鼠宫内生长发育的影响
目的
本研究采用小鼠模型，探讨体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)体外操作过程对小鼠胎盘发育及胎鼠宫内发育的影响。
资料与方法
研究对象：本研究采用6至8周龄CD1雌性小鼠及8至10周龄CD1雄性小鼠(均购自本校实验动物中心)，交配雄鼠20只，绝育雄鼠15只，供精雄鼠15只，供卵雌鼠160只，假孕雌鼠97只。由河南省农业科学院进行恒温饲养，雌性小鼠集群饲养，雄性小鼠单独饲养，12小时白天/12小时黑夜循环，自由饮食。该研究已通过“郑州大学第三附属医院伦理委员会”的审查。(批准号:LA-2017-03)
研究方法：选择6-8周龄的CD1小鼠分为3组，分别为：(1).雌性小鼠与雄性小鼠自然交配组(SC组)；(2).雌性小鼠与雄性小鼠体内受精，受精卵体外培养组(IVC组)；(3).雌性小鼠与雄性小鼠体外受精，体外培养组(IVF组)进行研究。胚胎发育的第10.5天，第14.5天以及第18.5天(即妊娠的早、中、晚孕期)，收集胎盘和胎鼠，比较三组小鼠的妊娠率、流产率，观察胎鼠宫内生长及胎盘发育。
统计学方法：采用SPSS21.0统计软件。三组间比较时，符合正态分布的计量资料用均值±标准差((x)±s)表示，行单因素方差分析。三组间两两比较时，若具有方差齐性，用LSD法，若方差不齐，用Tamhanes，sT2法，计数资料用(%)表示，采用(？2)检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
(1)妊娠早期(E10.5)，IVC组与IVF组小鼠妊娠率(32.5%，38.2%)低于SC组(56.5%)((P=0.012；P=0.014)，流产率(34.5%，45.2%)高于SC组(12.1%)，(P=0.000；P=0.000)，而IVC与IVF组间无统计学差异(P＞0.05)。
(2)妊娠中期(E14.5)，IVC组与IVF组胎鼠重量[(195.4±26.2)g，(221.5+32.6)g]低于SC组[(322.2±26.9)g](P=0.000；P=0.000)、胎盘效率(1.4±0.2，1.6±0.4)低于SC组(2.5±0.3)((P=0.000；P=0.000)，IVC组胎鼠重低于IVF组(P=0.006)、胎盘效率无统计学差异(P＞0.05)。
(3)妊娠晚期(E18.5)，IVC组与IVF组胎鼠重[(743.1±35.6)g，(617.7±29.8)g]低于SC组[(883.1±53.2)g](P=0.00；P=0.00)，胎盘效率(3．O+0.4，2.0+0.1)低于SC组(4.9±0.5)(P=0.00；P=0.00)，IVC组胎鼠重、胎盘效率均高于IVF组，差异有统计学意义(P=0.000；P=0.000)。
(4)纵观整个孕期后发现：妊娠早期，三组胎鼠重无统计学差异(SC组、IVC组、IVF组胎鼠重分别为：12.6±1.1；12.5±0.9；12.7±1.4)；妊娠中期，IVC组与IVF组胎鼠重低于SC组(P=0.000；P=0.000)，且IVC组体重低于IVF组，差异有统计学意义(P=0.006)；妊娠晚期，IVC组与IVF组胎鼠重均低于SC组(P=0.000；P=0.000)，且IVF组胎鼠重低于IVC组，差异有统计学意义(P=0.000)。
结论
(1)体外受精-胚胎移植可能造成小鼠早孕期妊娠率降低、流产率增加。
(2)体外受精-胚胎移植可能造成中晚孕期胎鼠重量下降，胎盘重量增加，胎盘效率降低。
(3)体外受精-胚胎移植可能造成胎鼠中晚孕期生长速度加快，以及孕期胎鼠宫内生长轨迹的改变。