黑曲霉HD404酸性蛋白酶的分离纯化及动力学性质研究

来源 :杭州大学 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fatty19830801
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酸性蛋白酶是由黑曲霉(Aspergillus niger)的诱变种HD404分泌的胞外酶,发酵液经过滤、硫酸铵沉淀、Sephadex G-25脱盐、CM-Sephadex C-80离子交换层析及SephadexG-75凝胶过滤,获得了电泳纯的酸性蛋白酶,分子量为54,000,等电点为3.8±0.2.分别研究了以酪蛋白、牛血清白蛋白、牛血红蛋白为底物时的动力学性质:酪蛋白为最适底物,在pH2.5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0.263%、0.278%和0.415%,Vmax分别为2075、1550和2793ugTyr·min<-1>·ml<-1>.大多数金属离子、EDTA、苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性没有影响,Ag<+>、甘油,叠氮钠对酶有轻微抑制作用,Cu<++>和Mn<++>对酶有激活作用,脲和乙酰胺在低浓度时对酶无激活作用或表现轻微抑制作用,而在高浓度时有激活作用,十二烷基硫酸钠和洗洁剂对酶活性有强烈抑制作用.研究表明在pH2.0-5.0,40℃以下酶的稳定性最好.
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