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目的：探讨慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)免疫效应蛋白表达与感染状态的关系,抑毒方治疗慢性乙型肝炎(CHB)的临床疗效及其调控免疫作用的机制。
方法：纳入96名HBV感染者作为实验组,另选11名年龄近似的献血员作为正常对照组。用胞内流式细胞法检测外周血CD4+细胞、CD8+细胞、CD16+CD56+NK内穿孔素、颗粒溶酶B、颗粒溶素、TNF-α、IFN-γ的表达。用ELISA法检测血清中HBV标记物,荧光PCR法检测CHB患者血清中HBV DNA的含量和常规肝功能生化检查。纳入35例慢性乙型肝炎患者,随机分为两组,其中治疗组22例予抑毒方,对照组13例予α-2b干扰素,治疗6个月,观察两组ALT、AST、TBL、HBVDNA、HBeAg及CD4+细胞、CD8+细胞、CD16+CD56+NK内穿孔素、颗粒溶酶B、颗粒溶素、TNF-α、IFN-γ的变化。
结果：
1.同正常对照组比较,肝功能异常高病毒者CD4+细胞表达的TNF-α增高(P<0.05);肝功能正常病毒高/低者和肝功能异常低病毒者NK表达的颗粒溶素增高(P<0.05);肝功能正常/异常的高病毒者,NK表达的IFN-γ降低(P<0.05);肝功能异常低病毒者NK表达的颗粒溶素增高(P<0.05)。慢性HBV感染者CD4+细胞表达的穿孔素、颗粒溶酶B、颗粒溶素,CD8+分泌的五种效应蛋白,NK表达的TNF-α同正常对照组无差异(P>0.05)。
2.不同感染状态的慢性HBV感染者,肝功能异常高病毒者CD4+细胞表达的IFN-γ低于肝功能正常高/低者(P<0.05);肝功能正常低病毒者CD8+细胞表达的颗粒溶酶B、TNF-α、IFN-γ高于肝功能异常高病毒者(P<0.05);肝功能正常高病毒者CD8+细胞表达的IFN-γ高于肝功能异常高病毒者(P<0.05);肝功能正常的高/低病毒者NK表达的穿孔素、颗粒溶酶B、颗粒溶素高于肝功能异常高/低病毒者(P<0.05);慢性HBV感染者CD4+细胞表达的穿孔素、颗粒溶酶B、颗粒溶素,CD8+细胞表达的穿孔素、颗粒溶素,NK表达的TNF-α在不同感染状态下无差异(P>0.05)。
3.细胞表达五种免疫蛋白的关系:CD4+细胞表达的颗粒溶酶B、IFN-γ、颗粒溶素两两正相关及穿孔素和颗粒溶酶B正相关(P<0.05);CD8+细胞表达的五种蛋白两两正相关(P<0.05);NK表达的五种效应蛋白中,除颗粒溶素与TNF-α不存在相关,五种蛋白之间两两正相关(P<0.05)。
4.抑毒方在降低ALT、AST,HBVDNA阴转率,HBeAg转阴率方面同α-2b干扰素无差异(P>0.05),在缓解临床症状方面优于干扰素,中医总有效率为95.45％而干扰素为61.54％(P<0.05)。
5.治疗后两组CD8+细胞、NK分泌的IFN-γ均降低(P<0.05)。抑毒方组还同时伴见CD4+细胞分泌颗粒溶素、IFN-γ,CD8+细胞表达颗粒溶酶B、TNF-α,NK表达的穿孔素、颗粒溶素降低(P<0.05)。干扰素组可见CD4+细胞颗粒溶酶B表达的减少(P<0.05)。
结论：
1.慢性HBV感染者PBMC表达的免疫效应蛋白含量和病毒水平、肝损伤密切相关。高病毒水平,CD4+细胞表达的TNF-α增高、IFN-γ减少；高病毒时肝损伤,CD4+、CD8+细胞表达IFN-γ,NK表达穿孔素、颗粒溶酶B、颗粒溶素减少；而当无肝损伤低病毒,转化为肝损伤高病毒水平时,CD8+细胞表达的颗粒溶酶B、TNF-α含量下调。
2.CD4+、CD8+、NK细胞表达的颗粒溶酶B、IFN-γ、颗粒溶素,穿孔素和颗粒溶酶B两两正相关,其余蛋白之间的相关性在不同的细胞中表现不一致。
3.抑毒方具有保肝降酶抗病毒功效,有效缓解临床症状,中医总有效率为95.45％。
4.抑毒方可作用于外周血PBMC,减少免疫效应蛋白表达及炎症因子分泌,促进肝损害痊愈,这可能是抑毒方保肝降酶的机制。
5抑毒方已经证实能有效抗病毒,而其又使PBMC免疫效应蛋白表达减少,而后者在理论上表示PBMC清除病毒能力削弱,因此推测其抗病毒的机理可能存在于其他环节,需要进一步研究。