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该论文开展了以下研究.第一章:扩增未知序列白蛉热病毒部分M和S片段的RT-PCR方法建立 目的:建立广泛扩增不同血清型未知序列白蛉热病毒M和S片段的RT-PCR方法,直接测序扩增产物得到基因序列.为白蛉热病毒属的基因鉴定和种系发生分析提供实验手段和序列资料.方法:总共42株白蛉热病毒被选为RT-PCR检测对象,其中包括7个血清组成员和8个未分组血清型.分别排列GenBank中已知白蛉热病毒M和S片段的氨基酸序列,选择保守区设计引物.从保守区取各已知病毒的特异序列合成寡核苷酸;再将相同位置的寡核式酸等量混合到一起,成为"鸡尾酒"引物,用于RT-PCR.扩增产物纯化后直接测序.结论:首次成功应用RT-PCR扩增多个血清型未知序列白蛉热病毒的部分M和S片段,并测出扩增产物序列,为白蛉热病毒属成员的基因鉴定与分类奠定了基础.第二章:白蛉热病毒属成员M和S片段种系发生关系分析 目的:开展基于白蛉热病毒部分M和S片段序列的种系发生关系分析,并将其与血清学分类比较分析,探讨白蛉热病毒属种发生关系特点.方法:在第一章获得部分S片段序列(370碱基)的基础上,进一步以Sicilian,Naples,Punta,Toro,Rift Valley fever,Frijoles血清组成员和Gabek Forest virus为研究对象,尝试用RT-PCR扩增和直接测序法得到这此病毒的S片段全序列,采用Neighbor-Joining方法对已获得的M和S片段序列进行种系发生分析.结论:基于部分M和S片段序列的种系发生树和血清学分类大体吻合.M和S片段种系关系树中Karimabad和Gabek Forest病毒组成同一个基因谱系,提示它们的基因有同源性.属于Punta Toro血清组的VP-334K,VP-366G和Co Ar 171616病毒是可疑的病毒重配体.立夫特谷热病毒未与其它病毒形成谱系.立夫特谷热类似病毒和Frijoles血清组M片段种系关系比S片段更近.第三章 立夫特谷热类似病毒和Frijoles血清组病毒对仓鼠的致病毒性观察和种系发生分析 目的:观察立夫特谷热类似病毒Frijoles血清组白蛉热病毒对仓鼠的致病性,并分析它们的M,S和L片段与立夫特谷热病毒的种系发生关系.方法:将立夫特谷热类似病毒和Frijoles血清组病毒分别腹膜内接种成年仓鼠.接种后每12h观察一次.感染后第13天终止观察,麻醉处死尚生存的仓鼠,采集血液和内脏.免疫荧光法检测仓鼠血清抗病毒lgG,大体解剖及组织学方法检查病理改变.RT-PCR扩增上述病毒L片段部分序列,结合M和S片段序列,分别计算出3个片段的种系发生树和序列之间差异.结论:立夫特谷热类似病毒和Frijoles血清组病毒通过腹膜内接种仓鼠,诱导了体液免疫反应,但不能导致动物发病或组织病变.立夫特谷热病毒的3个基因片段与立夫特异热类似病毒、Frijoles血清组病毒或其他白蛉热病毒属成员均不属于同一谱系.立夫特谷热类似病毒和Frijoles血清组病毒M片段的种系关系比S和L片段更近,但没有发现存在基因重配的证据.第四章 潘塔托若病毒和加别克森林病毒对仓鼠的致病性观察 目的:观察潘塔托若病毒和加别克森林病毒对仓鼠的致病性和导致的病理变化,与立夫特谷热病毒感染相比较,评价这两型病毒感染仓鼠用作为立夫特谷热替代模型的可行性.方法:潘塔托若病毒和加别克森林病毒分别皮下接种成年仓鼠.接种后每12h观察一次,每组每天处死4只以上动物,采集血液和组织标本.检测病毒血症水平,血清谷丙转氨酶(ALT)水平,组织学病理改变,免疫组化法检测仓鼠组织中病毒抗原分布.结论:潘塔托若病毒和加别克森林病毒感染仓鼠导致动物急性发病死亡,伴有高水平病毒血症,肝功能受损,肝脾坏死和间质性肺炎,病变涉及多个器官.感染动物肝脏检测到病毒抗原分布.这些表现与立夫特谷热病毒感染相似.因此这两型白蛉热病毒感染仓鼠可作为立夫特谷热的替代模型,并将有助于研究重度白蛉热病毒感染的致病机制和抗病毒治疗.