【摘 要】
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该文从人血浆中分离、纯化了β2GPⅠ:应用pQE30表达载体,表达了人β2GPⅠ及绿色荧光蛋白连接的β2GPⅠ(GFP-hβ2GPⅠ),应用ELISA和Western blot对重组蛋白进行鉴定;通过流式
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该文从人血浆中分离、纯化了β2GPⅠ:应用pQE30表达载体,表达了人β2GPⅠ及绿色荧光蛋白连接的β2GPⅠ(GFP-hβ2GPⅠ),应用ELISA和Western blot对重组蛋白进行鉴定;通过流式细胞术(FCM)检测KD患儿血小板与β2GPⅠ结合水平;ELISA方法检测了KD中抗β2GPⅠ抗体和抗心磷脂抗体;首次应用FCM对β2GPⅠ,抗β2GPⅠ抗体,抗β2GPⅠ抗体阳性的KD血浆,竞争性抑制annexinV与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)结合的特性进行了研究.结果表明:高氯酸沉淀联合三次层析技术是从血浆中分离纯化人β2GPⅠ较好的方法:克隆、表达、纯化的人β2GPⅠ和GFP-hβ2GPⅠ,经鉴定具有公认的生物活性;阐明血小板异常活化是KD病理生理过程中的重要环节;证实了在KD血中抗β2GPⅠ抗体有较高的阳性率,尤其在冠状动脉损害KD患儿,提示抗β2GPⅠ抗体很可能是KD发生冠脉损害的标志性指标;抗β2GPⅠ抗体及其阳性的KD血浆竞争性的抑制annexinV与HUVEC结合,这种结合依赖β2GPⅠ存在,其抑制作用随抗体浓度增加而增强,证实内皮细胞激活,血小板活化,自身抗体生成增多是KD特点,阐明β2GPⅠ及其抗体、annexinV与内皮细胞间相互作用可能是KD病理机制中关键阶段.
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