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背景:持续不卧床腹膜透析(Continuous ambulatory peritonealdialysis,CAPD)是终末期肾脏疾病(End-stage renal disease,ESRD)的治疗方法之一。腹膜纤维化(Peritoneal fibrosis,PF)是各种原因引起腹膜病理改变的最终结果。在长期接受CAPD的过程中,腹膜长期暴露在生物不相容性的腹透液中,导致了腹膜间皮细胞剥脱,最终发生腹膜纤维化和超滤衰竭(Ultrafiltration failure,UFF)。腹膜间皮细胞(Peritoneal mesothelial cells,PMCs)被认为是引起纤维化的主要细胞,研究发现上皮细胞向间充质细胞的转分化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)可能是肌成纤维细胞的重要来源之一,最近研究进一步证明EMT是腹膜纤维化的起始环节,但具体的机制仍还不太清楚。microRNA(miRNA)是存在于动植物基因组中的功能性非编码RNA,可通过诱导靶mRNA的切割降解和抑制基因翻译,调控相关基因的表达。最新研究发现miRNA参与TGF-β诱导的细胞EMT形成。但miRNA在腹膜间皮细胞上的表达以及在腹膜EMT和纤维化中的作用国内外尚未见报道。目的:探讨腹透流出液中培养的人腹膜间皮细胞转分化的改变以及miRNA194的表达,并分析其与EMT的相关性。方法:(1)取中南大学附属湘雅二医院及湘雅三医院腹膜透析中心的CAPD患者,按腹透时间分为两组:①新开管组②腹透一年以上组,取其夜间留腹腹透液分离培养人的腹膜间皮细胞,培养十四天后经倒置相差显微镜和免疫组化染色(Immunohistochemistry,HIS)鉴定,原代细胞用于实验;(2)采用实时荧光定量PCR中的Taqman荧光探针法检测miRNA194在上述两组腹膜间皮细胞中的表达;(3)分别用Westem-blot、real time PCR法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白和mRNA的表达;(4)分析miRNA194表达以及与α-SMA和E-cadherin表达的相关性。结果:(1)经鉴定,腹透流出液中培养的细胞95%以上为人腹膜间皮细胞(HPMCs)。(2)相差倒置显微镜观察新开管的患者腹透流出液培养的HPMCs形态上一小部分呈圆形,椭圆形的上皮样细胞,融合后呈铺路石状,与大网膜培养的腹膜间皮细胞相似;而大部分为上皮样细胞和梭形的纤维样细胞的混合存在;腹透一年以上的患者腹透流出液培养的HPMCs多为梭形的纤维样细胞。(3)Realtime PCR Taqman荧光探针法显示miRNAl94在腹膜间皮细胞中有表达,并且腹透一年以上的患者腹透流出液培养的HPMCs的表达水平明显高于新开管组患者的(P＜0.05)。(4)Real time PCR显示腹透一年以上的患者腹透流出液培养的HPMCs E-cadherin mRNA表达水平明显低于新开管组患者的(P＜0.05);腹透一年以上的患者腹透流出液培养的HPMCsα-SMA mRNA表达水平明显高于新开管组患者的(P＜0.05)。Westem-blot显示腹透一年以上的患者腹透流出液培养的HPMCs E-cadherin蛋白表达水平比新开管患者的表达水平下调(P＜0.05);腹透一年以上的患者腹透流出液培养的HPMCsα-SMA蛋白表达水平比新开管患者的表达水平上调(P＜0.05)。(5)新开管和腹透一年以上患者的腹透流出液培养的HPMCs miRNA194表达与E-cadherin mRNA表达呈负相关,相关系数r=-0.952;miRNA194表达与α-SMA mRNA表达呈正相关,相关系数r=0.760,均有统计学意义(P＜0.05)。结论:(1)miRNA194在腹透流出液中培养的HPMCs上有表达,并且miRNA194的表达随着腹透时间的延长明显增加。(2)腹透一年以上患者的腹透流出液中培养的HPMCs上的EMT相关分子标记物E-cadherin和α-SMA表达较新开管患者的明显异常,提示随着腹透时间的延长,腹透流出液中培养的HPMCs中EMT程度加重;(3)miRNA194与HPMCs的EMT相关基因异常表达相关,提示miRNA194与PD患者HPMCs EMT的发生有关。