【摘 要】
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目的研究不同浓度紫杉醇(PA)作用不同时间对人口腔舌鳞癌细胞株Tca83的影响。通过体外试验研究紫杉醇对人口腔舌癌的可能治疗作用，为临床治疗舌癌提供一部分理论依据。 方
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目的研究不同浓度紫杉醇(PA)作用不同时间对人口腔舌鳞癌细胞株Tca83的影响。通过体外试验研究紫杉醇对人口腔舌癌的可能治疗作用，为临床治疗舌癌提供一部分理论依据。
方法将不同浓度的紫杉醇(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L和1000nmol/L)作用于Tca83细胞不同时间(24h、48h、72h)后，分别采用光学显微镜观察细胞形态的变化；通过免疫组化法来定性观察Tca83细胞的bcl-2蛋白表达；采用吖叮橙(A0)荧光染色法观察经紫杉醇处理的Tca83细胞在荧光显微镜下的凋亡情况，并计算凋亡指数(AI)；采用MTT法检测Tca83细胞存活率；通过流式细胞仪(FCM)检测Tca83细胞的凋亡率和细胞周期变化。
结果光学显微镜下，对照组Tca83细胞为多角形，致密贴壁生长，细胞伸展良好，胞膜清晰。经紫杉醇处理后，Tca83细胞形态不规则，并且随着用药时间的延长和(或)浓度的增加，凋亡细胞逐渐增多，细胞变圆，体积缩小，胞质回缩，且悬浮细胞增多；通过免疫组化法在光学显微镜下定性观察Tca83细胞可见，空白对照组Tca83细胞膜和细胞质中的bcl-2蛋白被染色呈深棕黄色至棕红色，而24h的1000nmol/L组中，bcl-2蛋白减少或消失，所以不见染色的细胞质；荧光显微镜下吖啶橙染色发现，正常细胞无变化而凋亡细胞胞体缩小，呈荧光亢进。另外，荧光显微镜下计数凋亡细胞所得凋亡指数(AI)发现，除72h的1000nmol/L组外，其余各实验组的AI值随着作用时间和(或)紫杉醇浓度的增加而增加，且差异都有显著性；MTT比色法检测发现，除72h的1000nmol/L组及24h的1nmol/L组外，随着作用时间和(或)紫杉醇浓度的增加，细胞存活率在降低，而且差异有显著性。流式细胞仪分析细胞凋亡率结果也显示，除72h的1000nmol/L组外，其余各实验组之间随着紫杉醇浓度和(或)作用时间增加，细胞凋亡率也在增加，各组之间的差异有显著性。流式细胞仪检测细胞周期变化发现，低浓度紫杉醇在短时间内主要将Tca83细胞阻滞在G0/G1期，而高浓度紫杉醇或者低浓度紫杉醇在长时间作用后主要将Tca83细胞阻滞在G2/M期。
结论体外研究表明，紫杉醇可以诱导Tca83细胞凋亡，且在一定的时间及浓度范围内，呈时间和剂量依赖性；紫杉醇诱导Tca83细胞凋亡的同时伴随bcl-2表达水平的下调；低浓度紫杉醇在短时间内主要将Tca83细胞阻滞在G0/G1期；高浓度紫杉醇或者低浓度紫杉醇在长时间作用后主要将Tca83细胞阻滞在G2/M期。本实验研究结果为临床治疗提供了理论基础。
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