论文部分内容阅读
香栓菌Trametessuaveolens是一种生长在杨柳树上的药用真菌，具有特殊的芳香气味。近年来经过本草考证发现香栓菌的各项特征与古代记载的“白芝”相似，根据古代本草记载，白芝性温，归肺经，研究已经证明香栓菌针对肺经方面的药理作用，但有关香栓菌的研究和报道仍然较少，不够深入。因此本文在本实验室研究的基础上，对香栓菌的栽培驯化条件和药理平喘活性进行研究，为香栓菌的开发和利用提供理论依据。
综述部分介绍了香栓菌的国内外研究现状。
研究内容按照真实性评价、有效性评价的生药学研究体系分为五个章节。真实性评价包括香栓菌栽培驯化条件及生物学发育特征的研究，显微鉴定、DNA分子鉴定，并对香栓菌子实体的化学成分进行分析，在此基础上明确各提取层的组成成分；有效性评价包括研究香栓菌的平喘作用及抗氧化活性，并初步探索了不同提取物的体外抗肿瘤活性。
研究内容的第一章解决了香栓菌栽培的难题。为了筛选香栓菌的最佳出菇配方，对子实体不同生长阶段的生物学发育特征进行研究。试验采用杨树、柳树、秸秆木屑作为培养料设置了8种配比，每种分为对照A、测试组B共计16个配方进行栽培出菇筛选试验，并对不同时期的菌丝发育状况进行显微观察。结果发现柳树木屑、杨树木屑的配方均能成功栽培出香栓菌子实体，开袋后在90%–95%空气湿度、一定散射光、13–18℃的低温刺激下28d原基发育为菇蕾，继续培养28d后子实体成熟。其中配料为柳树木屑97%、蔗糖1%、石灰1%、石膏1%、含水量65%左右的配方出菇率最高，配料为柳树木屑的配方开袋后子实体长势最佳，采用边缘开袋方式最佳。明确了其子实体发育过程，先分化出白色蜂窝状原基，原基依靠孔状结构吸收营养后，在其上层包被形成黑色菇蕾，同时基部开始形成子实层；菇蕾内部生殖菌丝不断分化和发育，体积逐渐膨大，颜色由深变浅，菌丝分化出担子并产生担孢子，最终形成子实体。
第二章对栽培驯化和野外采集的香栓菌子实体进行了分子鉴定。通过提取样本的DNA，测序后比对ITS基因序列，最后构建分子系统发育树。结果证实了本研究中香栓菌材料的真实性，同时证明了栽培驯化的成功。研究为香栓菌的分子鉴定提供了方法指导，所测序列已上传至GenBank可供参考，并丰富了香栓菌的菌种库、标本库的建设，提供了香栓菌DNA分子鉴定新方法。
第三章对栽培驯化香栓菌进行化学成分研究，通过GC-MS分析水提取物、石油醚提取物、水提挥发油中的化学成分，探讨了有机溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、固相微萃取法三种不同提取方式对挥发性成分的影响。通过与前人的研究结果进行比对发现，栽培驯化香栓菌与野生香栓菌的化学成分基本相同，这两种资源可以相互替代，这为栽培驯化技术的推广和应用提供了理论依据；同时对香栓菌挥发性成分的分析解释了香栓菌中香气成分的主要来源，发现了具有药理活性的物质，为进一步的药理研究和物质基础探索提供了新思路。
第四章对香栓菌子实体提取物的平喘作用和抗氧化活性进行研究。平喘药理实验采用鸡卵清蛋白(OVA)致敏法建立小鼠过敏性哮喘模型，灌胃给药香栓菌水提物(高240mg/kg、中120mg/kg、低60mg/kg剂量)和石油醚提取物(高24mg/kg、中12mg/kg、低6mg/kg剂量)。比较各组小鼠行为变化，检测IgE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-4和IFN-γ等炎症指标，分类计数血液及支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞数量，分析肺组织病理变化；抗氧化实验采用香栓菌水提取物、乙酸乙酯提取物、氯仿提取物、石油醚提取物比较清除DPPH和ABTS自由基能力。平喘试验结果表明，香栓菌水提物中剂量(120mg/kg)能降低血中嗜酸性粒细胞(Eos)及血清中IgE含量，减少BALF中Eos数量，降低血清及肺组织匀浆中IL-4含量，提高IFN-γ/IL-4，减轻模型的病理改变；石油醚提取物高剂量(24mg/kg)能降低血中Eos和血清中IgE、TNF-α、IL-1、IL-6含量，减少肺组织炎症细胞浸润；抗氧化结果显示，香栓菌各层提取物均有不同程度的抗氧化能力，并呈现一定的量效关系，同时水提取物的抗氧化效果最显著。研究为深入研究香栓菌子实体对呼吸系统疾病的治疗提供了重要试验依据。
第五章香栓菌提取物体外抗肿瘤活性初探。在前面化学成分分析和体内药理活性研究的基础上，通过体外试验CCK-8法检测了香栓菌水提取物、石油醚提取物、水提挥发油对NCI-H460和MCF-7肿瘤细胞的活性抑制能力。结果表明香栓菌挥发油提取物能够有效抑制肿瘤细胞增殖，其对NCI-H460和MCF-7肿瘤细胞的半数抑制率(IC50)分别为24.1和19.2μg/mL，而水提取物和石油醚提取物在浓度为100μg/mL以内没有抑制活性。研究初步探索了香栓菌挥发油成分的体外抗肿瘤活性，为香栓菌的药用价值研究和活性物质的筛选提供了研究资料。
综上，本论文提供栽培驯化技术解决了香栓菌野外资源有限的问题，明确了香栓菌个体发育过程，发现了香栓菌的平喘药理活性和挥发油的抗肿瘤价值。
综述部分介绍了香栓菌的国内外研究现状。
研究内容按照真实性评价、有效性评价的生药学研究体系分为五个章节。真实性评价包括香栓菌栽培驯化条件及生物学发育特征的研究，显微鉴定、DNA分子鉴定，并对香栓菌子实体的化学成分进行分析，在此基础上明确各提取层的组成成分；有效性评价包括研究香栓菌的平喘作用及抗氧化活性，并初步探索了不同提取物的体外抗肿瘤活性。
研究内容的第一章解决了香栓菌栽培的难题。为了筛选香栓菌的最佳出菇配方，对子实体不同生长阶段的生物学发育特征进行研究。试验采用杨树、柳树、秸秆木屑作为培养料设置了8种配比，每种分为对照A、测试组B共计16个配方进行栽培出菇筛选试验，并对不同时期的菌丝发育状况进行显微观察。结果发现柳树木屑、杨树木屑的配方均能成功栽培出香栓菌子实体，开袋后在90%–95%空气湿度、一定散射光、13–18℃的低温刺激下28d原基发育为菇蕾，继续培养28d后子实体成熟。其中配料为柳树木屑97%、蔗糖1%、石灰1%、石膏1%、含水量65%左右的配方出菇率最高，配料为柳树木屑的配方开袋后子实体长势最佳，采用边缘开袋方式最佳。明确了其子实体发育过程，先分化出白色蜂窝状原基，原基依靠孔状结构吸收营养后，在其上层包被形成黑色菇蕾，同时基部开始形成子实层；菇蕾内部生殖菌丝不断分化和发育，体积逐渐膨大，颜色由深变浅，菌丝分化出担子并产生担孢子，最终形成子实体。
第二章对栽培驯化和野外采集的香栓菌子实体进行了分子鉴定。通过提取样本的DNA，测序后比对ITS基因序列，最后构建分子系统发育树。结果证实了本研究中香栓菌材料的真实性，同时证明了栽培驯化的成功。研究为香栓菌的分子鉴定提供了方法指导，所测序列已上传至GenBank可供参考，并丰富了香栓菌的菌种库、标本库的建设，提供了香栓菌DNA分子鉴定新方法。
第三章对栽培驯化香栓菌进行化学成分研究，通过GC-MS分析水提取物、石油醚提取物、水提挥发油中的化学成分，探讨了有机溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、固相微萃取法三种不同提取方式对挥发性成分的影响。通过与前人的研究结果进行比对发现，栽培驯化香栓菌与野生香栓菌的化学成分基本相同，这两种资源可以相互替代，这为栽培驯化技术的推广和应用提供了理论依据；同时对香栓菌挥发性成分的分析解释了香栓菌中香气成分的主要来源，发现了具有药理活性的物质，为进一步的药理研究和物质基础探索提供了新思路。
第四章对香栓菌子实体提取物的平喘作用和抗氧化活性进行研究。平喘药理实验采用鸡卵清蛋白(OVA)致敏法建立小鼠过敏性哮喘模型，灌胃给药香栓菌水提物(高240mg/kg、中120mg/kg、低60mg/kg剂量)和石油醚提取物(高24mg/kg、中12mg/kg、低6mg/kg剂量)。比较各组小鼠行为变化，检测IgE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-4和IFN-γ等炎症指标，分类计数血液及支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞数量，分析肺组织病理变化；抗氧化实验采用香栓菌水提取物、乙酸乙酯提取物、氯仿提取物、石油醚提取物比较清除DPPH和ABTS自由基能力。平喘试验结果表明，香栓菌水提物中剂量(120mg/kg)能降低血中嗜酸性粒细胞(Eos)及血清中IgE含量，减少BALF中Eos数量，降低血清及肺组织匀浆中IL-4含量，提高IFN-γ/IL-4，减轻模型的病理改变；石油醚提取物高剂量(24mg/kg)能降低血中Eos和血清中IgE、TNF-α、IL-1、IL-6含量，减少肺组织炎症细胞浸润；抗氧化结果显示，香栓菌各层提取物均有不同程度的抗氧化能力，并呈现一定的量效关系，同时水提取物的抗氧化效果最显著。研究为深入研究香栓菌子实体对呼吸系统疾病的治疗提供了重要试验依据。
第五章香栓菌提取物体外抗肿瘤活性初探。在前面化学成分分析和体内药理活性研究的基础上，通过体外试验CCK-8法检测了香栓菌水提取物、石油醚提取物、水提挥发油对NCI-H460和MCF-7肿瘤细胞的活性抑制能力。结果表明香栓菌挥发油提取物能够有效抑制肿瘤细胞增殖，其对NCI-H460和MCF-7肿瘤细胞的半数抑制率(IC50)分别为24.1和19.2μg/mL，而水提取物和石油醚提取物在浓度为100μg/mL以内没有抑制活性。研究初步探索了香栓菌挥发油成分的体外抗肿瘤活性，为香栓菌的药用价值研究和活性物质的筛选提供了研究资料。
综上，本论文提供栽培驯化技术解决了香栓菌野外资源有限的问题，明确了香栓菌个体发育过程，发现了香栓菌的平喘药理活性和挥发油的抗肿瘤价值。