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1.研究目的
1．1在传统旋毛虫血清IgG抗体检测的基础上，建立以旋毛虫肌肉幼虫虫体可溶性抗原（MLSA）、肌肉幼虫排泄分泌抗原（MLESA）、成虫虫体可溶性抗原（AWSA）和成虫排泄分泌抗原（AWESA）为诊断抗原的检测旋毛虫感染兔和旋毛虫病人唾液中抗旋毛虫IgG抗体的间接ELISA法。
1．2评价MLSA、MLESA、AWSA和AWESA为诊断抗原检测旋毛虫感染者唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的敏感性、特异性和重复性。
1．3初步探讨在血清标本采集困难时，唾液替代血清作为旋毛虫病诊断标本的可行性。
1．4为旋毛虫病诊断抗原的进一步提取、纯化、合成提供一定的理论依据。
2.研究方法
2．1用改良贝氏法收集旋毛虫肌肉幼虫、成虫。
2．2旋毛虫肌肉幼虫、成虫反复冻融、超声破碎、冷浸、离心，制备虫体可溶性抗原；旋毛虫肌肉幼虫、成虫在不含血清的RPMI—1640培养基中于5%CO2培养箱中分别培养24h，离心、收集上清、透析、浓缩后得到ES抗原。
2．3应用方阵滴定法，选择最佳旋毛虫抗原（MLSA、MLESA、AWSA、AWESA）浓度、血清稀释度、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔、山羊抗人IgG抗体稀释度。
2．4在血清检测条件的基础上，应用方阵滴定法选择唾液稀释度。
2．5旋毛虫感染兔唾液和血清、旋毛虫病人唾液和血清分别用于MLSA、MLESA、AWSA、AWESA抗原的敏感性试验；健康兔和人唾液和血清、其它寄生虫感染兔和病人唾液和血清分别用于MLSA、MLESA、AWSA、AWESA抗原的特异性试验；旋毛虫IgG抗体阳性唾液和血清、阴性唾液和血清，分别用于MLSA、MLESA、AWSA、AWESA抗原的重复性试验。
2．6分析MLSA、MLESA、AWSA、AWESA抗原检测唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的可行性。
2．7市售旋毛虫IgG抗体检测试剂盒为对照，选择敏感性、特异性、重复性均相对较好的诊断抗原测定兔感染旋毛虫不同时期的唾液和血清标本中抗旋毛虫IgG抗体。
3.结果
3．1 MLSA、MLESA、AWSA、AWESA抗原的包被浓度分别为8．0μg/ml、6．0μg/ml、10．0μg/ml、9．0μg/ml，血清稀释度分别为1：100、1：200、1：50、1：200，HRP—山羊抗兔IgG和山羊抗人IgG稀释度分别为1：2500和1：2000。
3．2唾液选择不做任何处理的原液。
3．3 MLSA、MLESA、AWSA、AWESA抗原检测旋毛虫感染兔唾液和血清特异性IgG抗体的敏感性分别为90%～100%和100%；检测旋毛虫病患者唾液和血清特异性IgG抗体的敏感性分别为60%～80%和100%。检测旋毛虫感染兔和旋毛虫病人唾液和血清特异性IgG抗体的特异性分别为93．10%、96．55%、89．65%、89．65%；81．03%、89．65%、77．59%、82．76%。检测唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的重复性均较好，唾液平均变异系数分别4．22%、4．45%、4．28%、4．59%；血清平均变异系数分别为4．12%、5．16%、3．03%、3．83%。
3．4市售旋毛虫IgG抗体检测试剂盒检测旋毛虫感染前和感染后兔唾液和血清特异性IgG抗体阳性率分别为0～90%和0～100%，除0、1、3周外其余各周唾液A值与血清A值均存在线性相关。MLESA和AESA检测唾液和血清特异性IgG抗体阳性率分别为0～95%、0～90%；0～100%、0～100%，除0、1、2周外其余各周唾液A值与血清A值均存在线性相关。
4.结论
4．1 AWESA和MLESA检测唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的敏感性、特异性、重复性均相对较好，可以作为旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。
4．2 AWESA、MLESA与市售试剂盒检测唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的结果具有相似性。
4．3在血清标本采集困难的情况下，间接ELISA法检测唾液中抗旋毛虫IgG抗体可以作为旋毛虫病免疫诊断的辅助方法。