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广州管圆线虫[Angiostrongylus cantonensis(Chen,1935)Doughery,1946]是引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎的重要病原体。人是广州管圆线虫的非适宜宿主，幼虫侵入人体后，通过肠道进入血液，在体内移行，最终侵犯中枢神经系统，引起广州管圆线虫病。
广州管圆线虫病主要发生在热带和亚热带地区，东南亚各国、太平洋和印度洋各岛屿均有暴发或散发流行。我国最早在台湾发现了首例病人，大陆已有数次暴发流行或小流行，尤其是2006年夏季北京的暴发，患者达160余人，引起广泛关注。随着人们饮食习惯的改变，该病病例呈逐年增多趋势。WHO公布的21世纪新出现的全球威胁性传染病中就包括广州管圆线虫病。我国卫生部在2003年将广州管圆线虫病列为“新发传染病”。但目前关于该病的诊断、治疗及致病机制方面的研究仍然较少。
天冬氨酸蛋白酶(Aspartie proteases,ASP)是具有特征的一大类活性酶。有研究，其在利什曼原虫、盘尾丝虫、血吸虫及疟原虫等寄生虫中，参与了重要的代谢过程，作用越来越受重视。随着药物研究的发展，ASP已经是一些临床用药的靶位。因此，研究ASP在广州管圆线虫中的作用，寻找其在诊断及疫苗药物研发方面可能的潜在价值有着重要意义。研究目的在生物信息学分析的基础上，体外克隆表达广州管圆线虫ASP基因，获得重组蛋白；免疫组织化学反应对蛋白进行虫体定位；分析其免疫学活性，动物实验观察其在广州管圆线虫致病中的作用，探讨其在诊断和疫苗药物研发中的潜在价值。
研究方法：生物信息学分析广州管圆线虫ASP基因序列，进行结构和可能的功能预测。PCR法从幼虫cDNA文库扩增该基因，定向克隆到原核表达载体pET-30a(+)，在大肠杆菌BL21中诱导表达蛋白，SDS-PAGE和Westem-blotting分析鉴定表达产物。优化表达条件，大量表达重组蛋白，经Ni-IDA His·Bind Resin亲和层析柱纯化蛋白。免疫组化对蛋白进行虫体定位。酶联免疫法测定重组蛋白作为诊断抗原的敏感性和特异性。动物实验观察，重组蛋白的致病性及免疫小鼠抗血清对广州管圆线虫病的保护作用。
研究结果：体外成功克隆并扩增了目的基因，构建了原核表达体系，经过优化条件，获得大量可溶性表达的融合目的蛋白，亲和层析纯化重组蛋白，经SDS-PAGE分析，蛋白纯化效果较好；免疫组化定位显示目的蛋白主要在虫体皮层表达；ELISA及Western-blotting反应鉴定重组蛋白作为诊断抗原的敏感性和特异性，发现重组蛋白能和广州管圆线虫病人血清及感染广州管圆线虫小鼠7天后血清呈阳性反应，和钩虫、肝吸虫病人血清存在一定的交叉反应性；动物实验发现，重组蛋白免疫小鼠可引起小鼠脑部病理变化，其免疫血清对小鼠体内的广州管圆线虫有一定的杀灭作用。
结论：获得了广州管圆线虫ASP基因序列，体外实现了对该基因的克隆及在原核体系的可溶性表达，得到了纯化的融合蛋白。免疫组化定位显示，蛋白主要在幼虫虫体的皮层表达。融合蛋白具有免疫原性和抗原性，该蛋白免疫小鼠可引起小鼠脑部病理变化，免疫后小鼠能诱导对广州管圆线虫部分免疫保护作用。