降胆固醇乳酸菌体外筛选条件优化的研究

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乳酸菌对人体的益生效果已经得到人们的普遍认可,随着社会发展和科研的进步,针对现在社会的高血脂人群的不断增加,乳酸菌的降胆固醇特性成为乳酸菌界研究的热点,并取得了很大的进展。由于乳酸菌降胆固醇的机理及其复杂,因此乳酸菌降胆固醇体外筛选方法一直是评价乳酸菌降胆固醇效果的有效筛选方法。   本实验以10株乳酸菌为研究对象,从三方面对降胆固醇乳酸菌体外筛选中存在的问题进行了研究探讨,(1)降胆固醇乳酸菌体外筛选培养基对筛选结果的影响:对三种现在研究中用到的高胆固醇培养基蛋黄-MRS、胆固醇胶束溶液-MRS和乙醇胆固醇溶液-MRS培养基的体外筛选效果进行了比较,并对筛选效果较好的培养基的配制方法进行了探讨;(2)乳酸菌培养时间对其降胆固醇能力的影响:主要探讨了乳酸菌的降胆固醇特性与发酵时间的关系,重点比较了处于稳定期和对数生长期的乳酸菌体外降胆固醇效果的不同;(3)体外筛选培养基中胆固醇快速测定方法探讨研究:参考血液中胆固醇的测定方法,探讨了磷铁硫法、邻苯二甲醛直接显色法和硫酸铁铵显色法测定培养基中胆固醇含量的效果,并与常用到的皂化提取邻苯二甲醛显色法进行了比较。主要研究结果如下:   (1)10株乳酸菌在蛋黄-MRS、胆固醇胶束溶液-MRS和乙醇胆固醇溶液-MRS培养基中均表现出降胆固醇特性,但是在三种培养基中的降胆固醇能力高低顺序不完全相同,有的株菌差异显著;相比较而言胆固醇胶束溶液-MRS培养基有较好的筛选效果;胆固醇胶束配制最佳方法为:0.1g胆固醇,0.2g胆盐,0.1g蔗糖酯充分混匀,加入1mL吐温80充分混匀,再加入3mL冰乙酸,混匀后水浴70℃加热至充分溶解,然后超声乳化15min,即得到均匀的胆固醇胶束溶液。   (2)乳酸菌的降胆固醇能力并不都是随着发酵时间的延长呈现规律性增加趋势的;乳酸菌在高胆固醇培养基中生长10h就能表现出明显的降胆固醇特性;对数生长期的乳酸菌比稳定期的乳酸菌降胆固醇能力稍高;用乳酸菌的胆固醇去除效力评价乳酸菌的降胆固醇能力比用胆固醇去除率更具有参考价值。   (3)乳酸菌在胆固醇胶束-MRS培养基中培养10h,采用改良的非皂化硫酸铁铵法或者磷铁硫法可以实现体外降胆固醇乳酸菌大批量样本的初筛。
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