【摘 要】
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真核细胞翻译起始因子-4E(eukaryotic initiation factor 4E, eIF4E)是第一个在头颈鳞癌中100%过度表达的原癌基因,主要通过调控肿瘤恶性相关基因的核质转运或翻译致癌,在大
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真核细胞翻译起始因子-4E(eukaryotic initiation factor 4E, eIF4E)是第一个在头颈鳞癌中100%过度表达的原癌基因,主要通过调控肿瘤恶性相关基因的核质转运或翻译致癌,在大多数人类恶性肿瘤中表达,而在正常成熟组织中不表达或低表达,可望成为肿瘤基因治疗新的有效靶点。脱氧核酶(DNAzyme)是具有裂解RNA酶活性的DNA分子,可特异性切割任意靶mRNA。本项目体外转录出含eIF4E基因编码区的mRNA,设计合成针对靶mRNA的10-23DNAzyme-eIF4E,体外类生理条件下观察其对靶mRNA的切割活性,筛选出高效、特异性的10-23DNAzyme3-eIF4E。应用脂质体将5-FAM荧光素标记的10-23DNAzyme3-eIF4E转染喉癌细胞系Hep-2,倒置相差荧光显微镜观察Hep-2细胞对酶的摄取;半定量RT-PCR及Western-blot检测酶10-23DNAzyme3-eIF4E对eIF4E基因表达的抑制效果,MTT、流式细胞仪、吖啶橙染色等检测10-23DNAzyme3-eIF4E对Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。结果表明我们设计10-23DNAzyme3-eIF4E能有效切割eIF4E基因mRNA;能分别从mRNA水平和蛋白质水平抑制Hep-2细胞中eIF4E的表达;并促进喉癌细胞凋亡,抑制其细胞增殖。本项目采用的脱氧核酶作为一种新的mRNA水平的强效灭活因子,为喉癌的基因治疗提供了新的方法,具有广阔的临床应用前景。
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