论文部分内容阅读
恶性肿瘤是一种细胞增殖及死亡障碍性疾病,肿瘤细胞凋亡调控机制的失常对恶性肿瘤的演进过程起重要影响。促进肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤细胞的增殖是肿瘤治疗的关键手段之一。虽然目前的抗肿瘤药物对绝大多数肿瘤均有一定的疗效,但其仍存在着较为严重的毒副作用。故寻找高效及低毒的抗肿瘤药物仍然是当前肿瘤治疗的当务之急。传统中药九香虫,具有确切的中医抗肿瘤临床基础,然而其鲜虫提取物(血淋巴)诱导肿瘤细胞凋亡机制不明。如何从细胞生物学的角度进一步认识其抗癌机制,从而能更合理地应用九香虫去治疗癌症且取得理想的临床效果是我们应该努力研究的一个方向。本研究旨在以往实验基础上,进一步证明九香虫血淋巴可诱导肿瘤细胞凋亡,并探讨其抗肿瘤机制,为开发高效及低毒的抗肿瘤药物提供实验基础。本文利用Bradford法测定了九香虫提取物(血淋巴)蛋白含量,采用CCK-8法进行体外抗癌活性检测,利用ELISA法验证九香虫血淋巴是否通过诱导SGC-7901、MCF-7细胞凋亡而达到抗癌作用,结合蛋白免疫印迹法与荧光定量PCR方法初步探索其诱导两种细胞凋亡机制。研究结果如下:1、采用Bradford法检测九香虫蛋白含量。以蛋白含量标准曲线Y=1.2348X+0.6240,r=0.9827(n=7)为指标,算出九香虫血淋巴蛋白含量:12.2611mg/L。2、应用CCK-8比色法检测OD值,计算抑制率;检测出九香虫血淋巴对人胃癌SGC-7901、人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖具有抑制作用,且在浓度为0.82、4.09、8.17、12.26 mg/L时呈时间和浓度依赖。并利用ELISA法证明不同浓度的九香虫血淋巴(2.45、4.90、7.36、9.81、12.26 mg/L)处理24 h后,两种细胞组蛋白-DNA片断含量明显高于空白对照组,故结果说明九香虫血淋巴通过诱导胃癌SGC-7901、乳腺癌MCF-7细胞凋亡途径而达到抗癌作用。3、蛋白免疫印迹法结果说明经九香虫血淋巴处理的SGC-7901、MCF-7细胞Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白较对照组细胞表达明显上调。经九香虫血淋巴处理的两种细胞Bcl-2蛋白,较对照组细胞表达明显下调。结果表明说明经九香虫血淋巴诱导的两种细胞可能通过触发内源信号途径使细胞发生不可逆的凋亡。4、实时荧光定量PCR与蛋白免疫印迹法Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2所测结果一致,表明经九香虫血淋巴诱导的SGC-7901、MCF-7细胞可能通过触发其内源性凋亡通路使肿瘤细胞发生不可逆的凋亡。该研究从mRNA及蛋白水平分析了九香虫血淋巴作用肿瘤细胞后相关基因、蛋白质表达,初步明确了其抗肿瘤机制。研究结果有利于九香虫的进一步开发利用,为开发安全、有效、拥有自主知识产权的抗肿瘤新药提供依据和材料,同时本研究也可为其他药用昆虫资源的研究和开发提供参考。