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本研究论文包括以下两个方面:（一）Palladin在ATRA诱导APL细胞分化过程中的功能研究;（二）Palladin纺锤体相关功能研究。 第一部分 Palladin在ATRA诱导APL细胞分化过程中的功能研究Palladin（也称RIG-K）是一个微丝骨架相关蛋白，在ATRA诱导NB4细胞分化过程中表达上调。为了研究palladin在细胞分化过程中的功能，我们利用慢病毒干扰系统将palladin敲减(knockdown)，并观察其敲减对于细胞分化过程中形态学的变化、细胞表面分子标志的表达以及增殖、运动功能等方面的影响。形态学和流式结果表明，palladin的敲减对于NB4细胞的形态学分化特征和细胞表面CD11b的表达影响较小;相反，palladin的敲减对分化过程中微丝骨架的结构改变以及迁移、趋化、吞噬等粒细胞功能有明显的抑制作用。为了进一步了解palladin在NB4细胞分化过程中发挥的功能，我们利用趋化因子芯片检测了palladin敲减前后NB4细胞株上清液中趋化因子水平的改变，发现palladin敲减后CCL2、IL-8、CCL3和CCL20等趋化因子的水平显著降低。由于细胞迁移、侵袭以及产生趋化因子的能力与维甲酸综合症发病过程中肺、肾等组织白血病细胞浸润密切相关，palladin与维甲酸综合症的关系引起了我们的高度关注。我们利用体外细胞模型研究了APL细胞中palladin的表达对于维甲酸综合症发病过程的影响。结果表明，palladin的敲减可以明显降低分化的APL细胞向肺组织的趋化运动以及侵袭肺组织的能力。因此palladin表达增加可能与维甲酸综合症的发生有关。 第二部分 Palladin纺锤体相关功能研究免疫荧光结果表明，在有丝分裂期palladin部分定位在纺锤体上。我们构建了palladin过表达和敲减的HEK293T细胞株，用低浓度的Nocodazole解聚纺锤体的星体微管，结果发现palladin可以使纺锤体两极向细胞中部靠近的速度加快;随后在应用Cytochalasin D（微丝解聚药物，1μM）处理的HEK293T细胞中发现，palladin(288～420)区段的表达会促使多极纺锤体比例的显著升高。这两个实验结果提示，palladin可能具有增加纺锤丝对于中心体的拉力以及促进中心体聚集的功能。因此，palladin在有丝分裂期的功能可能不仅仅局限于对微丝骨架的影响，其在有丝分裂期也参与了纺锤体功能的调控。另外，通过对分裂间期和分裂期细胞palladin蛋白表达情况进行研究，我们发现，随着细胞周期的进行，palladin蛋白在PAGE胶上的泳动速率有一个周期性的变化。在细胞分裂间期palladin蛋白分子量约为90kD，但进入有丝分裂期后，palladin的蛋白条带上升到100kD左右的位置，这提示palladin在有丝分裂期发生了某种形式的翻译后修饰。磷酸酶处理可以使蛋白条带恢复分裂间期的大小，所以可以确定这种蛋白条带迁移是磷酸化引起的。通过对palladin一系列截短型和突变体的研究，我们最终确定，palladinN端的脯氨酸富集区内的Ser85、87、97、119四个丝氨酸残基是有丝分裂期发生磷酸化修饰的位点。磷酸化对于palladin微丝或者纺锤体相关功能可能具有重要的调控功能，这一点还需要进一步的研究。