大鼠骨髓间充质干细胞移植四氯化碳所致大鼠肝硬化模型的实验研究

• 作 者: 徐献忠
• 机 构: 广州医科大学
• 出 处: 广州医学院 广州医科大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 肝硬化 细胞移植

[目的]
传统的治疗手段目前难以从根本上修复肝脏的不可逆性损害，随着肝移植的研究发展，干细胞移植有望成为从根本上治疗肝脏不可逆损害的一种新方法。近年来发现骨髓间充质干细胞(MSCs)在一定条件下经体内体外诱导可以定向分化为肝样细胞，有望成为治疗终末期肝病的新型种子细胞。本实验主要研究大鼠骨髓MSCs在体外分离、纯化、扩增后经门静脉移植四氯化碳诱导所致肝硬化的大鼠模型后大鼠肝功能改变及肝脏病理改变的情况，为骨髓间充质细胞治疗肝硬化以及其他肝功能衰竭提供实验依据。
[方法]
第一部分，大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、纯化及大量增值扩增。第二部分用纯化及扩增后的MSCs经门静脉移植四氯化碳诱导所致大鼠肝硬化模型。其中第一部分采用密度梯度离心法结合贴壁法分离MSCs，在体外扩增后证实为MSCs，并能大量增值；第二部分用四氯化碳作为诱导剂，每周皮下注射两次，连续8周，再行肝功能检查及肝脏病理检查，制作成肝硬化大鼠后，将体外纯化、扩增的MSCs经门静脉移植四氯化碳诱导的肝硬化大鼠模型，观察移植后肝硬化大鼠的肝功能变化及肝脏的病理变化。
[结果]
第一部分，原代培养中细胞为分散、克隆集落方式增殖；当相邻集落融合成片达80％以上，细胞排列呈漩涡状，细胞问的界限清楚，细胞呈长梭状。此外，还存在少数的小圆细胞。传代后，细胞不以集落形式生长，而是均匀分布长梭形细胞平均生长，杂质细胞明显减少，MSCs纯度升高。传代3次后的第3代细胞经流式细胞仪检测细胞表面抗原，CD29和CD44阳性，CD34和CD45阴性，符合MSCs的特点。
第二部分，用四氯化碳诱导8周后，大鼠的食欲下降，肝功能检查结果示血清碱性磷酸酶(ALP)含量明显升高，血清白蛋白(ALB)及胆固醇(CHO)含量明显降低，并且病理示8周肝硬化组大鼠肝内胶原纤维在被膜下、汇管区和中央静脉区的增生明显，相互联接形成假小叶，呈现早期肝硬化的特征。MSCs经门静脉移植肝硬化大鼠后，MSCs移植组的血清ALP含量出现了明显的下降及MSCs移植组的血清ALB和CH0含量明显升高。提示在移植了MSCs 4周后，MSCs移植组大鼠的某些肝功能得以改善。病理检查结果示MSCs移植组肝内胶原纤维增生程度明显减轻，尽管假小叶仍然存在，但小叶周围和小叶内的胶原纤维明显减少，小叶中还出现了较多形态正常的肝细胞。
[结论]
第一部分，通过密度梯度离心及联合贴壁培养能在体外培养出高纯度的MSCs，可以作为组织工程的种子细胞。
第二部分，说明了MSCs可能在肝硬化大鼠体内分化成为具有肝细胞功能的细胞，并改善了肝硬化大鼠的部分肝功能及肝脏的部分病理结构，为今后临床肝硬化行干细胞移植提供了实验依据。