头花蓼对H.pylori相关性胃炎细胞增殖、凋亡的影响及其机制的探讨

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目的:复制幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染胃粘膜上皮细胞(Human gastric epithelial cells,GES-1)细胞模型,观察头花蓼对其周期、凋亡的影响,为头花蓼进一步开发利用提供实验依据。  方法:培养人胃粘膜上皮细胞(GES-1),采用 MTT法观察细胞的增殖情况并绘制生长曲线。取对数期细胞与不同浓度头花蓼(8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL、128μg/mL、256μg/mL、512μg/mL、1024μg/mL)共同培养48h,计算细胞生长抑制率。将细胞细菌不同比例(1:20;1:50;1:100;1:200)共培养数小时,以确定构建H.pylori相关性胃炎细胞(Helicobacterpylori-associated gastritis cell,HAG)模型的合适比例及时间。对上清液进行H.pylori快速尿素酶、微需氧培养及 IL-8的检测,鉴定感染细胞模型是否构建成功。模型构建成功后,将实验分为3组:空白对照组:不加H.pylori不加头花蓼的GES-1细胞组;模型对照组:加H.pylori的GES-1细胞组;药物组:加H.pylori加头花蓼的GES-1细胞组,分别于加药后24h、48h、72h收集各组细胞制成细胞悬液。采用流式细胞仪观察细胞周期分布、凋亡情况;采用RT-PCR法检测p38MAPK、JAK2、STAT3、NF-κBp65、Bax、Bcl-2表达水平,以观察头花蓼对人胃粘膜上皮细胞凋亡相关基因表达的影响。  结果:1.GES-1细胞生长曲线显示:细胞于培养的48h进入对数生长期,120h进入平台期。2.头花蓼浓度高于64μg/mL时,细胞数量明显减少,细胞增殖受到抑制;低于64μg/mL时,细胞数量没有明显变化,细胞增殖无影响。3. H.pylori SS2000与GES-1以50:1的比例共同培养24h,其上清液H.pylori及IL-8鉴定阳性,成功复制H.pylori相关性胃炎模型。4.头花蓼对HAG的影响:与模型组相比,头花蓼在高于8μg/mL以上时,可不同程度降低IL-8的水平。  结论:  1.头花蓼对GES-1的细胞毒性较小,其最大无毒浓度为64μg/mL。  2.头花蓼具有良好的治疗H.pylori感染的能力,其机制可能通过调节?基因的表达,维持胃粘膜上皮细胞的增殖与凋亡的平衡,从而治疗H.pylori感染相关疾病。
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