【摘 要】
：
腺相关病毒(AAV)作为一种目的基因病毒载体已经被广泛应用于人类各种疾病的基因治疗研究中,由于其本身具有诸多其它载体所无可比拟的优点,而被公认为比较理想的基因运载工具.
论文部分内容阅读
腺相关病毒(AAV)作为一种目的基因病毒载体已经被广泛应用于人类各种疾病的基因治疗研究中,由于其本身具有诸多其它载体所无可比拟的优点,而被公认为比较理想的基因运载工具.该研究目的在于构建出一种同时携带GDNF(glial cell derived ne-urotrophic factor)与TH(tyrosine hydroxylase)基因的重组腺相关病毒载体(二基因分别由两个不同启动子启动),检测两个目的基因在体内体外表达情况,以此来探讨同一载体上双基因是否能够同时表达及参与协同治疗帕金森病(Parkinsons Disease,PD)的可能性.构建重组AAV-GDNF/TH:首先用限制性内切酶BamHI、SphⅠ从质粒pHSV-TH上切下带有HSV-TK启动子的完整TH片段,片段两个粘性末端用T4DNA聚合酶进行补平处理;同时HincⅡ单酶切质粒pAAV-GDNF,获得线性载体,双平端用CIAP(碱性磷酸酶)进行去磷酸化处理,而后用T4DNA连接酶将两个处理后的片段平端连接起来.经过转化、质粒提取、酶切鉴定及DNA测序证实载体pAAV-GDNF/TH构建正确.基因转染采用AAV He-1per free系统,pAAV-LacZ作为对照、辅助质粒包括pAAV-RC和pAAV-Helper,通过磷酸钙沉淀法将三种质粒共转染HEK293细胞,获得具有感染活力的病毒颗粒.该实验结果表明我们构建的pAAV-GDNF/TH双目的基因载体体内体外均能够表达.该实验结果为AAV在PD基因治疗中的应用及开展多基因治疗PD提供了一些依据.
其他文献
获得性免疫缺陷综合症(AIDS)是危害人类生命健康的严重传染病,而HIV-1整合酶(integrase)在该疾病病原体复制过程中起重要作用,由于人体内没有其同源蛋白,选择针对该靶标的药物毒副作用相对小,成为近年来HIV-1药物研究的一个热点。β-二酮酸类化合物表现出良好的整合酶抑制活性,喹啉酮酸类化合物作为其生物电子等排体表现出同样的良好活性。基于已被美国FDA批准上市的喹啉酮酸类化合物GS-91
以往采用悬滴法体外诱导ES细胞向心肌细胞分化较为繁琐,难以获得足够的心肌细胞进行进一步研究.我们改进诱导方法,采用直接悬浮培养和O.8％DMSO诱导,建立了简便、高效的定向诱
配电系统是将电能直接供给用户的系统,其供电可靠性体现出电网的管理水平,同时也对用户用电需求有着重要的影响。本文主要是将分布式电源以及负荷当作一个系统,在之前传统的配电网基础上引入“微网”这一概念。微网在实际应用过程中能够将并网的储能装置、分布式电源、负荷有机地结合在一起,改变传统配网的单电源结构,并且可以形成独立的小型电网进行孤岛运行,其远比传统电网智能、灵活、复杂,因此传统的配网模型和理论分析方
本研究以新疆4种盐生植物为研究对象，分析其内生细菌多样性及群落组成，从中发掘有应用价值的菌种资源和新物种资源;探讨不同土壤类型、不同生长发育阶段和不同组织部位对盐生植
随着船舶电力系统不断扩大，电网拓扑结构日益复杂，传统的分析方法难以预测各种事故的发生，这对船舶电力系统的分析提出了更高的要求。数字仿真系统具有不受仿真对象规模及复杂程
该文综述了嗜盐菌的种类、生理学、嗜盐机制、应用等研究进展,介绍了当前嗜盐放线菌的一些研究.通过对18株分别从新疆、青海等地采集的盐碱地土样中分离获得的嗜盐或耐盐放线
在配电系统中最行之有效的优化控制手段当属配电网络重构,其通过操动开关来转移负荷、改变结构,以优化运行或恢复供电。因此,配电网静态优化重构与故障恢复重构被认为是实现配电网自愈功能的重要途径,其研究与应用具有重要的现实意义。针对配电网重构智能优化算法容易“早熟”收敛的不足,将一种细菌觅食优化算法和粒子群算法相结合的混合智能算法——BF-PSO (Bacterial foraging optimizat
本课题旨在建立大肠杆菌表达的重组新蛭素(Neorudin，EH)的生产工艺，并对分离纯化获得的EH蛋白进行初步质量检测、结构确证等方面的研究，以适应将来的产业化。 发酵工艺的建立
学习和记忆的神经基础一直以来是神经科学研究的重要领域。在环路水平上，同时放电的神经元之间突触联系可能会加强，形成一个神经元集群“cellassembly”;记忆可能存储于神经元
在免疫系统发育过程中，及时有效地清除自身反应性T细胞和/或B细胞是维持自身免疫耐受的重要环节。BCR信号转导在B细胞发育、成熟、增殖及分化等过程中起重要作用。B细胞在未成