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目的：B组柯萨奇病毒(coxsackievirus B，CVB)是病毒性心肌炎和扩张型心肌病的主要病原。CVB感染心肌成纤维细胞不发生产毒性感染但可损伤细胞，其机制不明。我们推测CVB可能通过诱导心肌成纤维细胞自噬而导致心肌成纤维细胞的损伤，本研究通过体外培养心肌成纤维细胞观察了CVB3诱导心肌成纤维细胞自噬的作用及其病理意义。
方法：(1)原代培养Balb/c小鼠心肌成纤维细胞；(2)免疫组化和免疫荧光方法检测盘状结构域受体(DDR-2)的表达确定心肌成纤维细胞的性质；(3)光镜观察CVB3感染心肌成纤维细胞的细胞病变；电镜观察CVB3感染6h后心肌成纤维细胞的超微结构改变；(4)RT-qPCR检测感染的心肌成纤维细胞CVB3病毒核酸水平；(5)心肌成纤维细胞经pEGFP-LC3转染和CVB3感染，荧光显微镜下观察EGFP-LC3的表达和分布特点；(6)Western blot检测CVB3感染的心肌成纤维细胞中LC3的活化；(7)ELISA和RT-qPCR检测CVB3感染的心肌成纤维细胞的炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达变化。
结果：(1)通过免疫组化、免疫荧光方法可以在培养的心肌成纤维细胞中检测到心肌成纤维细胞特异表达的DDR-2，确定均为心肌成纤维细胞；(2)RT-qPCR检测表明CVB3感染原代心肌成纤维细胞48h内病毒mRNA水平持续升高，但是荧光纤维镜下却未观察到荧光蛋白的表达；(3)电镜观察可见CVB3感染的心肌成纤维细胞胞浆大量双膜自噬体；(4)CVB3感染6h后心肌成纤维细胞胞浆EGFP-LC3在核周呈点状聚集；加入自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-MA)后可抑制EGFP-LC3的点状聚集分布；Western blot检测CVB3感染的心肌成纤维细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达上调。(5)ELISA和RT-qPCR检测表明CVB3感染36h内，IL-6、IL-β和TNF-α的蛋白和mRNA表达均升高，在3-MA处理组和si-Atg-7处理组细胞均受到抑制；(6)Western blot检测CVB3感染的Balb/c小鼠心肌组织LC3-Ⅱ蛋白表达上调；(7)pEGFP-CVB3转染也可诱导心肌成纤维细胞发生自噬。
结论：(1)CVB3感染可损伤心肌成纤维细胞病变；(2)诱导细胞自噬是CVB3损伤心肌成纤维细胞的主要分子机制之一；(3)CVB3诱导自噬导致心肌成纤维细胞的炎性因子表达异常；(4)CVB诱导心肌成纤维细胞自噬可能是CVB病毒性心肌炎和扩张型心肌病的重要分子机制之一。